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新型雌激素受体共调节因子CGI-27的功能研究

目录第1-5页
英文缩写词表第5-7页
摘要第7-9页
Abstract第9-11页
前言第11-15页
材料与方法第15-67页
 1. 材料第15-17页
   ·菌株和细胞株第15页
   ·质粒第15页
   ·常用试剂盒第15页
   ·细胞培养及转染试剂第15-16页
   ·抗体第16页
   ·其它分子生物学试剂和化学试剂第16页
   ·主要实验仪器第16-17页
 2. 方法第17-26页
   ·质粒构建与鉴定第17-20页
   ·siRNAs 表达载体的构建第20页
   ·哺乳动物细胞的转染第20页
   ·GST 融合蛋白的诱导表达第20-21页
   ·GST 融合蛋白的纯化第21页
   ·GST 沉淀(pull-down)分析第21页
   ·免疫共沉淀第21-22页
   ·Western blot 分析第22页
   ·荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性测定第22页
   ·转录激活活性检测第22页
   ·细胞免疫化学实验第22-23页
   ·核质分离实验第23页
   ·结晶紫实验第23页
   ·流式细胞仪检测细胞生长周期第23-24页
   ·软琼脂实验第24页
   ·裸鼠皮下成瘤实验第24页
   ·免疫组织化学第24-26页
 结果第26-35页
  1. CGI-27 表达谱的研究第26-31页
   ·酵母双杂交筛选与ERα相互作用的蛋白第26页
   ·CGI-27 多克隆抗体的制备第26-28页
   ·组织和细胞株中CGI-27 蛋白的表达第28-31页
  2. CGI-27 与ER 存在相互作用第31-35页
   ·验证CGI-27 与ER 的相互作用第31-33页
   ·CGI-27 与ERα相互作用区域的定位第33-35页
   ·CGI-27 与ERα在细胞内存在共定位第35-61页
  3. CGI-27 与ER 相互作用的生物学功能第37-53页
   ·CGI-27 siRNA 的构建与鉴定第37-39页
   ·CGI-27 对ERs 转录活性的影响第39-46页
   ·CGI-27 对ERα活性的影响依赖于它们之间的相互作用第46-48页
   ·CGI-27 对ERα下游基因表达的影响第48页
   ·CGI-27 促进细胞增殖第48-51页
   ·CGI-27 能促进乳腺癌细胞的非锚定依赖生长第51页
   ·CGI-27 能促进肿瘤形成及转移第51-52页
   ·Western blot 检测临床乳腺癌组织标本第52-53页
  4. CGI-27 发挥功能的分子机制第53-61页
   ·ERBB2 协同增强CGI-27 升高ERα的转录活性第53-55页
   ·CGI-27 能升高ERK1/2、AKT 和ERα的磷酸化第55-57页
   ·ERα突变体能减弱CGI-27 对ER 转录活性的升高第57-58页
   ·CGI-27 能升高ERα Total Ser 的磷酸化第58-59页
   ·CGI-27 (H192A)突变体不能升高ERα的转录活性第59-61页
 讨论第61-67页
  1. 多抗制备和表达谱的研究第61-62页
  2. 相互作用第62-63页
  3. 转录活性第63-64页
  4. 分子机制的研究第64-67页
结论第67-68页
参考文献第68-74页
杨智洪个人简历第74-77页
致谢第77页

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