目录 | 第1-5页 |
英文缩写词表 | 第5-7页 |
摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
前言 | 第11-15页 |
材料与方法 | 第15-67页 |
1. 材料 | 第15-17页 |
·菌株和细胞株 | 第15页 |
·质粒 | 第15页 |
·常用试剂盒 | 第15页 |
·细胞培养及转染试剂 | 第15-16页 |
·抗体 | 第16页 |
·其它分子生物学试剂和化学试剂 | 第16页 |
·主要实验仪器 | 第16-17页 |
2. 方法 | 第17-26页 |
·质粒构建与鉴定 | 第17-20页 |
·siRNAs 表达载体的构建 | 第20页 |
·哺乳动物细胞的转染 | 第20页 |
·GST 融合蛋白的诱导表达 | 第20-21页 |
·GST 融合蛋白的纯化 | 第21页 |
·GST 沉淀(pull-down)分析 | 第21页 |
·免疫共沉淀 | 第21-22页 |
·Western blot 分析 | 第22页 |
·荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性测定 | 第22页 |
·转录激活活性检测 | 第22页 |
·细胞免疫化学实验 | 第22-23页 |
·核质分离实验 | 第23页 |
·结晶紫实验 | 第23页 |
·流式细胞仪检测细胞生长周期 | 第23-24页 |
·软琼脂实验 | 第24页 |
·裸鼠皮下成瘤实验 | 第24页 |
·免疫组织化学 | 第24-26页 |
结果 | 第26-35页 |
1. CGI-27 表达谱的研究 | 第26-31页 |
·酵母双杂交筛选与ERα相互作用的蛋白 | 第26页 |
·CGI-27 多克隆抗体的制备 | 第26-28页 |
·组织和细胞株中CGI-27 蛋白的表达 | 第28-31页 |
2. CGI-27 与ER 存在相互作用 | 第31-35页 |
·验证CGI-27 与ER 的相互作用 | 第31-33页 |
·CGI-27 与ERα相互作用区域的定位 | 第33-35页 |
·CGI-27 与ERα在细胞内存在共定位 | 第35-61页 |
3. CGI-27 与ER 相互作用的生物学功能 | 第37-53页 |
·CGI-27 siRNA 的构建与鉴定 | 第37-39页 |
·CGI-27 对ERs 转录活性的影响 | 第39-46页 |
·CGI-27 对ERα活性的影响依赖于它们之间的相互作用 | 第46-48页 |
·CGI-27 对ERα下游基因表达的影响 | 第48页 |
·CGI-27 促进细胞增殖 | 第48-51页 |
·CGI-27 能促进乳腺癌细胞的非锚定依赖生长 | 第51页 |
·CGI-27 能促进肿瘤形成及转移 | 第51-52页 |
·Western blot 检测临床乳腺癌组织标本 | 第52-53页 |
4. CGI-27 发挥功能的分子机制 | 第53-61页 |
·ERBB2 协同增强CGI-27 升高ERα的转录活性 | 第53-55页 |
·CGI-27 能升高ERK1/2、AKT 和ERα的磷酸化 | 第55-57页 |
·ERα突变体能减弱CGI-27 对ER 转录活性的升高 | 第57-58页 |
·CGI-27 能升高ERα Total Ser 的磷酸化 | 第58-59页 |
·CGI-27 (H192A)突变体不能升高ERα的转录活性 | 第59-61页 |
讨论 | 第61-67页 |
1. 多抗制备和表达谱的研究 | 第61-62页 |
2. 相互作用 | 第62-63页 |
3. 转录活性 | 第63-64页 |
4. 分子机制的研究 | 第64-67页 |
结论 | 第67-68页 |
参考文献 | 第68-74页 |
杨智洪个人简历 | 第74-77页 |
致谢 | 第77页 |