| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| ·MDV研究综述 | 第13-18页 |
| ·MD和MDV | 第13-14页 |
| ·MDV Ⅰ型病毒的致病机理 | 第14-15页 |
| ·MDV Ⅰ型病毒主要毒力基因的功能 | 第15-18页 |
| ·细菌人工染色体技术与疱疹病毒基因功能研究 | 第18-19页 |
| ·Cre/loxP重组酶修饰系统 | 第19-20页 |
| ·Cre/loxP重组酶修饰系统简介 | 第19-20页 |
| ·Cre/loxP重组方式 | 第20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 MDVL-ZY株细菌人工染色体重组病毒转移载体构建 | 第22-34页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·质粒、菌种、病毒与试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-29页 |
| ·马立克氏病超强毒株L-ZY株的培养 | 第24页 |
| ·L-ZY重组病毒转移载体同源臂及加压筛选标记基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·BAC载体基本功能基因片段的制备 | 第25页 |
| ·pUAloxPB质粒构建 | 第25-26页 |
| ·pUAloxPB-gpt质粒构建 | 第26-27页 |
| ·重组病毒转移载体pUAloxPB-gpt-BAC11的构建 | 第27-28页 |
| ·pUAloxPB-gpt-BAC11载体loxP位点体外功能鉴定 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-33页 |
| ·转移载体同源臂及gtp筛选标记基因的鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·pUAloxPB质粒鉴定结果 | 第30页 |
| ·pUAloxPB-gpt质粒构建及鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组病毒转移载体pUAloxPB-gpt-BAC11的鉴定 | 第31-32页 |
| ·pUAloxPB-gpt-BAC11两个loxP位点体外功能鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| ·pUAloxPB-gpt-BAC11重组病毒转移载体的通用性 | 第33页 |
| ·BAC载体基本功能基因的完整性是确保BAC形成的重要环节 | 第33-34页 |
| 第三章 MDV L-ZY细菌人工染色体重组病毒的获得 | 第34-41页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·菌种、细胞、病毒与试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·电转化转移载体质粒pUAloxPB-gpt-BAC11到宿主菌DH10B | 第35页 |
| ·转移载体pUAloxPB-gpt-BAC11质粒的提取和纯化 | 第35-36页 |
| ·转染用MDV L-ZY感染细胞总DNA的制备 | 第36页 |
| ·转移载体质粒与Total-DNA的共转染 | 第36页 |
| ·重组病毒rv-MDVL-ZY的初步筛选和富集 | 第36-37页 |
| ·重组病毒rv-MDVL-ZY的纯化 | 第37页 |
| ·重组病毒rv-MDVL-ZY的鉴定 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-39页 |
| ·转移载体与病毒感染细胞总DNA的共转染获得重组病毒 | 第38页 |
| ·重组病毒BAC功能区的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| ·MDV基因组的完整性对于启动病毒的感染至关重要 | 第39页 |
| ·用磷酸钙法转染是得到重组病毒的关键 | 第39-40页 |
| ·用gpt做筛选标记是获得重组病毒的关键 | 第40-41页 |
| 第四章 BAC分子克隆化病毒的获得及感染性BAC的筛选 | 第41-51页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·菌种、细胞、病毒与试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-47页 |
| ·电转化分子克隆化病毒感受态细菌DH10B的制备 | 第41-42页 |
| ·环化重组病毒细胞总DNA的提取 | 第42页 |
| ·电转化筛选MDV L-ZYBAC | 第42-43页 |
| ·MDV L-ZYBAC的初步鉴定 | 第43页 |
| ·MDV L-ZY BAC质粒的提取和纯化 | 第43页 |
| ·MDV L-ZYBAC中BAC-gpt功能序列的PCR鉴定 | 第43页 |
| ·L-ZYBAC中MDV病毒基因组的PCR鉴定 | 第43-45页 |
| ·转染用MDV L-ZYBAC DNA的提取和纯化 | 第45页 |
| ·CEF载体总DNA的制备 | 第45-46页 |
| ·将L-ZYBAC-DNA转染进CEF | 第46页 |
| ·拯救重组病毒BAC-derived MDVL-ZY | 第46页 |
| ·拯救重组病毒BAC-derived MDVL-ZY的鉴定 | 第46页 |
| ·重组病毒、野生病毒与拯救的重组病毒在体外生长特性的比较 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-49页 |
| ·MDV L-ZYBAC的初步鉴定结果 | 第47页 |
| ·MDV L-ZY BAC的病毒基因组的PCR鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·重组病毒BAC-derived MDVL-ZY的拯救 | 第48-49页 |
| ·重组病毒rv-MDVL-ZY、野生病毒wt-MDVL-ZY与拯救的重组病毒BAC-derived MDVL-ZY的病毒生长曲线的比较 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·适时提取病毒环化的基因组DNA是获得MDV BAC的关键 | 第49页 |
| ·电转条件的优化是获得MDVBAC的关键 | 第49-50页 |
| ·L-ZY BAC DNA的浓度和纯度是重组病毒BAC-derived MDVL-ZY的拯救的关键 | 第50-51页 |
| 第五章 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
