| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-28页 |
| ·香蕉采后成熟研究的重要意义 | 第12-13页 |
| ·香蕉的经济价值 | 第12页 |
| ·香蕉果实采后成熟过程对香蕉品质和采后货架期的影响 | 第12页 |
| ·香蕉果实采后成熟机理的研究是获得优质香蕉果实的基础 | 第12-13页 |
| ·香蕉采后乙烯生物合成研究进展 | 第13-15页 |
| ·乙烯生物合成的途径 | 第13页 |
| ·香蕉采后乙烯生物合成的特点 | 第13-14页 |
| ·香蕉采后乙烯生物合成的调控 | 第14-15页 |
| ·香蕉采后乙烯与果实成熟的关系 | 第15-17页 |
| ·乙烯的信号转导途径 | 第16页 |
| ·香蕉果实成熟过程中的生理变化 | 第16-17页 |
| ·植物谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD)研究进展 | 第17-25页 |
| ·植物GAD、γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyrate,GABA)概述 | 第17页 |
| ·植物GAD合成及活性调控 | 第17-20页 |
| ·植物GABA作用机制与功能 | 第20-23页 |
| ·植物GAD、GABA与乙烯生物合成、果实成熟的关系 | 第23-25页 |
| ·本研究的目的意义 | 第25-26页 |
| ·技术路线 | 第26-28页 |
| 研究思路 | 第26-27页 |
| 技术路线 | 第27-28页 |
| 2 材料、试剂、仪器 | 第28-29页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·菌种与载体 | 第28页 |
| ·化学药品 | 第28页 |
| ·生化制剂 | 第28页 |
| ·分子生物学试剂盒 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| 3 方法 | 第29-46页 |
| ·香蕉基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·香蕉不同器官、果实不同时期总RNA提取 | 第30-31页 |
| ·RACE获得MaGAD1 cDNA全长序列 | 第31-35页 |
| ·从香蕉cDNA文库中克隆MaGAD1基因5'端 | 第31-34页 |
| ·MaGAD1 cDNA全长克隆 | 第34-35页 |
| ·半定量RT-PCR | 第35-37页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR引物设计 | 第36页 |
| ·RT-PCR的反应程序 | 第36页 |
| ·RT-PCR的反应体系 | 第36-37页 |
| ·荧光定量RT-PCR分析MaACO1、MaACS1、MaGAD1 | 第37-38页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第37页 |
| ·荧光定量PCR的引物设计 | 第37页 |
| ·荧光定量PCR的反应体系和反应程序 | 第37-38页 |
| ·荧光定量PCR的定量方法 | 第38页 |
| ·Southern blot分析 | 第38-41页 |
| ·基因组DNA限制性内切酶消化 | 第38页 |
| ·探针的标记 | 第38-39页 |
| ·DNA的印迹转移 | 第39-40页 |
| ·Southem杂交 | 第40-41页 |
| ·采后香蕉果实的处理 | 第41-42页 |
| ·采后香蕉果实乙烯、1.MCP处理 | 第41页 |
| ·采后香蕉果实MaGAD1诱导剂、抑制剂的筛选处理 | 第41-42页 |
| ·采后香蕉果实GABA、AOAA处理 | 第42页 |
| ·香蕉果实采后生理指标的测定 | 第42-43页 |
| ·香蕉果实采后乙烯释放量的测定 | 第42-43页 |
| ·香蕉采后果实的硬度测定 | 第43页 |
| ·香蕉果实采后可溶性总糖的测定 | 第43页 |
| ·香蕉采后果实淀粉含量的测定 | 第43页 |
| ·香蕉果实采后成熟度的划分 | 第43页 |
| ·MaGAD1正义和反义GFP(Green fluorescence protein,GFP)植物表达载体的构建 | 第43-46页 |
| ·MaGAD1插入片段的获得 | 第44-45页 |
| ·pCAMBIA1302载体的获得 | 第45页 |
| ·目的片段和pCAMBIA1302载体的连接 | 第45页 |
| ·感受态的制备、转化、重组质粒的筛选和鉴定、测序 | 第45-46页 |
| 4 结果 | 第46-63页 |
| ·MaGAD1基因的克隆 | 第46-47页 |
| ·MaGAD1基因5'端的克隆 | 第46页 |
| ·MaGAD1cDNA全长克隆 | 第46-47页 |
| ·MaGAD1基因的序列分析 | 第47-50页 |
| ·生物信息学分析 | 第47页 |
| ·同源性比较 | 第47页 |
| ·进化树分析 | 第47-50页 |
| ·MaGAD1 Southern blot分析 | 第50-52页 |
| ·MaGAD1基因在香蕉不同器官的差异表达 | 第52页 |
| ·乙烯、1-MCP处理条件下MaGAD1基因在香蕉采后不同成熟度的差异表达 | 第52-53页 |
| ·香蕉采后果实乙烯释放速率的变化规律 | 第53页 |
| ·基于香蕉果实采后成熟度和MaGAD1基因转录的果实成熟诱导物与抑制物筛选 | 第53-56页 |
| ·GABA、AOAA处理条件下香蕉果实采后成熟度、硬度、可溶性总糖和淀粉含量的变化 | 第56-60页 |
| ·GABA、AOAA处理对香蕉果实成熟度的影响 | 第56-57页 |
| ·GABA、AOAA处理下香蕉果实硬度的变化 | 第57-58页 |
| ·GABA、AOAA处理下香蕉果实可溶性总糖含量的变化 | 第58-59页 |
| ·GABA、AOAA处理下香蕉果实淀粉含量的变化 | 第59-60页 |
| ·GABA、AOAA处理条件下MaGAD1、MaACO1、MaACS1的差异表达 | 第60-62页 |
| ·GABA和AOAA处理下MaGAD1表达的变化 | 第60页 |
| ·GABA和AOAA处理下MaACS1表达的变化 | 第60-61页 |
| ·GABA和AOAA处理下MaACO1表达的变化 | 第61-62页 |
| ·MaGAD1基因植物表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第62页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第62-63页 |
| 5 讨论 | 第63-70页 |
| ·MaGAD1基因的克隆与序列分析 | 第63页 |
| ·MaGAD1基因在香蕉采后不同器官的差异表达分析 | 第63页 |
| ·乙烯、1-MCP处理条件下MaGAD1基因在香蕉采后不同成熟度的差异表达与内源乙烯释放的关系 | 第63-64页 |
| ·基于香蕉采后成熟度和MaGAD1转录的果实成熟诱导物与抑制物的筛选 | 第64-65页 |
| ·筛选依据 | 第64-65页 |
| ·筛选结果:GABA和AOAA处理分别促进和延缓了香蕉果实成熟 | 第65页 |
| ·GABA和AOAA处理条件下香蕉采后成熟过程的变化 | 第65-66页 |
| ·GABA和AOAA处理条件下香蕉采后成熟过程的基本生理变化 | 第65-66页 |
| ·GABA和AOAA处理条件下香蕉采后成熟过程的基本生理变化与果实品质的关系 | 第66页 |
| ·GABA和AOAA处理条件下香蕉采后成熟过程中MaGAD1、MaACO1、MaACS1差异表达分析 | 第66-68页 |
| ·GABA和AOAA分别能诱导和抑制MaGAD1的表达 | 第66页 |
| ·GABA和AOAA分别促进和延缓香蕉果实成熟可能与乙烯生物合成关键酶基因MaACS1 表达密切相关(MaACS1是成熟乙烯生物合成的关键酶基因) | 第66-68页 |
| ·MaGAD1的表达与香蕉果实采后乙烯生物合成及果实成熟密切相关,MaGAD1调控香蕉采后乙烯生物合成、果实成熟可能的途径: | 第68-69页 |
| ·MaGAD1基因GFP植物表达载体构建的目的与意义及转基因的前景分析 | 第69-70页 |
| 6 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
