| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-32页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌的研究进展 | 第16-23页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌分类地位 | 第16-17页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌的理化学特性 | 第17页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌的荚膜 | 第17-18页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌的外膜蛋白 | 第18-19页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌的血清型 | 第19-20页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌的质粒与非结构蛋白 | 第20-21页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌的毒力基因与致病因子 | 第21-22页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌的疫苗与抗体 | 第22-23页 |
| ·细菌降解明胶的蛋白酶研究概况 | 第23-32页 |
| ·肠球菌的明胶酶 | 第24-27页 |
| ·脆弱拟杆菌液化明胶的胞外蛋白酶 | 第27-29页 |
| ·溶组织梭菌液化明胶的胞外蛋白酶 | 第29-30页 |
| ·其它细菌液化明胶的胞外蛋白酶 | 第30-32页 |
| 第2章 引言 | 第32-36页 |
| ·选题背景及意义 | 第32-33页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌及其危害 | 第32页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌致病相关因子研究的意义 | 第32-33页 |
| ·课题前期相关研究结果 | 第33页 |
| ·主要研究内容 | 第33-34页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌流行菌株的分离鉴定及液化明胶特性测定 | 第33页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌产明胶酶的条件优化及酶的分离纯化 | 第33页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌明胶酶的生物学活性研究 | 第33-34页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌明胶酶基因克隆与分析 | 第34页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌明胶酶理化性质测定 | 第34页 |
| ·技术路线 | 第34-36页 |
| 第3章 鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及液化明胶特性测定 | 第36-46页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·主要实验仪器与设备 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要培养基和溶液配制 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌流行菌株的分离与鉴定 | 第37-39页 |
| ·细菌对雏鸭的致病性测定 | 第39页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌明胶液化特性测定 | 第39-40页 |
| ·明胶酶谱 | 第40-41页 |
| ·传代对细菌明胶液化特性的影响 | 第41页 |
| ·实验结果与分析 | 第41-45页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌的分离及理化鉴定 | 第41页 |
| ·16SrRNA基因部分序列分析 | 第41-43页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌分离株致病性测定 | 第43页 |
| ·分离菌株液化明胶特性测定 | 第43-44页 |
| ·传代对细菌液化明胶特性的影响 | 第44页 |
| ·明胶酶谱分析 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第4章 鸭疫里默氏杆菌产明胶酶的条件优化及酶的分离纯化 | 第46-60页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要溶液配制 | 第46-47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·供试菌株种 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·明胶酶活性的定量测定 | 第47-48页 |
| ·培养基中蛋白胨、酵母粉及氯化钠对产酶的影响 | 第48页 |
| ·部分理化因素对产酶的影响 | 第48页 |
| ·酶的分离纯化 | 第48-50页 |
| ·SDS-PAGE检测与相对分子量的测定 | 第50-51页 |
| ·液化明胶活性和比活力测定 | 第51页 |
| ·实验结果与分析 | 第51-58页 |
| ·酶活力定量检测方法的建立 | 第51-52页 |
| ·培养基中蛋白胨、酵母粉及氯化钠浓度对产酶的影响 | 第52-53页 |
| ·部分理化因素对产酶的影响 | 第53-54页 |
| ·酶的分离纯化 | 第54-56页 |
| ·SDS-PAGE检测与相对分子量测定 | 第56-57页 |
| ·明胶酶活性及比活力测定 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第5章 鸭疫里默氏杆菌明胶酶的生物学活性研究 | 第60-84页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器设备 | 第60页 |
| ·菌株及明胶酶 | 第60页 |
| ·鸭胚及实验动物 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-67页 |
| ·对鸭胚成纤维细胞形态的影响 | 第60-61页 |
| ·对鸭胚成纤维细胞的半数致死浓度及半数生长抑制浓度 | 第61-62页 |
| ·对雏鸭的毒性 | 第62页 |
| ·对细菌致病性的影响 | 第62页 |
| ·对雏鸭外周血细胞数量的影响 | 第62-63页 |
| ·对外周血中白细胞吞噬、杀菌能力的影响 | 第63-64页 |
| ·对红细胞免疫功能的影响 | 第64页 |
| ·对血清生化指标的影响 | 第64页 |
| ·对血清补体活性的影响 | 第64-65页 |
| ·对雏鸭脾淋巴细胞增殖活性和IgG生成的影响 | 第65-66页 |
| ·对雏鸭血-脑屏障机能的影响 | 第66-67页 |
| ·实验结果与分析 | 第67-80页 |
| ·对鸭胚成纤维细胞形态的影响 | 第67-68页 |
| ·对鸭胚成纤维细胞的半数致死浓度和半数生长抑制浓度 | 第68页 |
| ·对雏鸭的毒性作用 | 第68-70页 |
| ·对细菌致病性的影响 | 第70-72页 |
| ·对雏鸭对血细胞数量的影响 | 第72-73页 |
| ·对雏鸭血清生化指标的影响 | 第73-74页 |
| ·对雏鸭外周血血清总补体活性的影响 | 第74-75页 |
| ·对雏鸭外周血白细胞吞噬、杀菌能力的影响 | 第75-76页 |
| ·对雏鸭红细胞免疫功能的影响 | 第76页 |
| ·对雏鸭脾淋巴细胞增殖和IgG生成的影响 | 第76-77页 |
| ·对血-脑屏障机能的影响 | 第77-80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| ·明胶酶对雏鸭免疫功能影响 | 第80-81页 |
| ·明胶酶对肝功能的影响 | 第81页 |
| ·明胶酶对雏鸭血-脑屏障机能的影响 | 第81-82页 |
| ·小结 | 第82-84页 |
| 第6章 鸭疫里默氏杆菌明胶酶基因克隆及分析 | 第84-106页 |
| ·实验材料 | 第84-85页 |
| ·供试菌株 | 第84页 |
| ·工程菌与质粒 | 第84页 |
| ·酶和生化试剂 | 第84页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第84-85页 |
| ·引物 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-94页 |
| ·N-端氨基酸残基序列测定 | 第85页 |
| ·细菌基因组 DNA提取 | 第85-86页 |
| ·单特异性引物 PCR | 第86-89页 |
| ·基因组步移分离5’和3’侧翼序列 | 第89-94页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌明胶酶基因 DNA序列分析 | 第94页 |
| ·实验结果与分析 | 第94-103页 |
| ·N-氨基酸残基端序列测定 | 第94页 |
| ·单特异性引物 PCR | 第94-95页 |
| ·5’-端核苷酸序列 | 第95-96页 |
| ·3’-端核苷酸序列 | 第96-98页 |
| ·基因的验证 | 第98-99页 |
| ·基因的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第99-103页 |
| ·小结 | 第103-106页 |
| 第7章 鸭疫里默氏杆菌明胶酶的理化性质测定 | 第106-112页 |
| ·实验材料 | 第106页 |
| ·实验方法 | 第106-108页 |
| ·明胶酶作用底物分析 | 第106-107页 |
| ·热稳定性与降解明胶的最适作用温度 | 第107页 |
| ·pH值稳定性与降解明胶的最适pH值 | 第107页 |
| ·金属金属离子对活性的影响 | 第107页 |
| ·金属离子络合物对活性的影响 | 第107-108页 |
| ·蛋白化学修饰剂对活性的影响 | 第108页 |
| ·实验结果与分析 | 第108-111页 |
| ·明胶酶作用底物 | 第108页 |
| ·明胶酶的最适作用温度与热稳定性 | 第108-109页 |
| ·最适作用pH值与pH值稳定性 | 第109-110页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第110页 |
| ·金属离子络合物对酶活性的影响 | 第110页 |
| ·蛋白化学修饰剂对活性的影响 | 第110-111页 |
| ·小结 | 第111-112页 |
| 第8章 结论及创新性 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-126页 |
| 攻读博士学位期间发表论文及参研课题情况 | 第126-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
