| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 文献综述 | 第14-37页 |
| 1.害虫种群抗药性适合度 | 第14-17页 |
| ·害虫种群适合度的概念 | 第15页 |
| ·害虫抗药性与适合度的关系 | 第15-17页 |
| 2 高温对昆虫的影响 | 第17-26页 |
| ·高温对昆虫的致死效应及其影响因子 | 第18-20页 |
| ·高温对昆虫影响的生理生化机理 | 第20-23页 |
| ·应用高温防治害虫 | 第23-26页 |
| 3 害虫对逆境的防御机制 | 第26-29页 |
| ·热激蛋白 | 第26-28页 |
| ·保护酶 | 第28-29页 |
| 4 阿维菌素及其害虫抗药性 | 第29-32页 |
| 5 朱砂叶螨抗药性研究 | 第32-34页 |
| 6 抗性治理对策 | 第34-37页 |
| 引言 | 第37-39页 |
| 第一章 朱砂叶螨抗药性、高温适应性及其交互耐性测定 | 第39-46页 |
| 1 材料与方法 | 第39-40页 |
| ·虫源 | 第39页 |
| ·朱砂叶螨耐高温能力测定 | 第39页 |
| ·热预刺激对朱砂叶螨耐高温能力的影响 | 第39-40页 |
| ·生物测定 | 第40页 |
| ·数据处理 | 第40页 |
| ·朱砂叶螨实验种群生命表组建及种群参数估计 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-44页 |
| ·朱砂叶螨种群的耐热性 | 第40-42页 |
| ·朱砂叶螨在46℃高温下的存活能力 | 第40-41页 |
| ·不同热激温度对朱砂叶螨在极端温度下存活率的影响。 | 第41-42页 |
| ·热激时间对朱砂叶螨在极端温度下存活率的影响 | 第42页 |
| ·热激次数对朱砂叶螨在极端温度下存活率的影响 | 第42页 |
| ·朱砂叶螨种群的耐药性 | 第42-43页 |
| ·40℃下朱砂叶螨发育历期及产卵量 | 第43页 |
| ·40℃下朱砂叶螨种群存活率生殖力 | 第43-44页 |
| ·40℃下朱砂叶螨生命表参数和相对适合度 | 第44页 |
| 3 小结与讨论 | 第44-46页 |
| 第二章 朱砂叶螨适应阿维菌素和温度胁迫的生化机制 | 第46-67页 |
| 第一节 阿维菌素和温度胁迫对朱砂叶螨自由基和保护酶的影响 | 第46-60页 |
| 1 材料与方法 | 第47-50页 |
| ·供试朱砂叶螨 | 第47页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第47-48页 |
| ·测定方法 | 第48-50页 |
| ·材料处理 | 第48页 |
| ·粗酶液制备 | 第48页 |
| ·酶源蛋白质测定 | 第48页 |
| ·自由基(O_2~(?))测定 | 第48-49页 |
| ·保护酶系活性测定 | 第49-50页 |
| ·数据处理 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-59页 |
| ·高温胁迫后朱砂叶螨体内自由基和保护酶活性的变化 | 第50-53页 |
| ·高温胁迫对朱砂叶螨体内自由基的影响 | 第50页 |
| ·高温胁迫对朱砂叶螨保护酶活性的影响 | 第50-52页 |
| ·自由基、三种保护酶活性间的相关性分析 | 第52-53页 |
| ·低温胁迫后朱砂叶螨体内自由基和保护酶活性的变化 | 第53-56页 |
| ·低温胁迫对朱砂叶螨体内自由基的影响 | 第53-54页 |
| ·低温胁迫对朱砂叶螨保护酶活性的影响 | 第54-55页 |
| ·自由基、三种保护酶活性间的相关性分析 | 第55-56页 |
| ·阿维菌素处理后朱砂叶螨体内自由基和保护酶活性的变化 | 第56-59页 |
| ·对自由基的影响 | 第56页 |
| ·对SOD活性的影响 | 第56-57页 |
| ·对CAT活性的影响 | 第57页 |
| ·对POD活性的影响 | 第57-58页 |
| ·自由基、三种保护酶活性间的相关性分析 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 第二节 抗阿维菌素朱砂叶螨热激蛋白的研究 | 第60-67页 |
| 1 材料和方法 | 第61-64页 |
| ·材料 | 第61-63页 |
| ·方法 | 第63-64页 |
| ·蛋白质的提取 | 第63页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第63-64页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-65页 |
| ·朱砂叶螨可溶性蛋白质种类 | 第64-65页 |
| ·朱砂叶螨可溶性蛋白质含量 | 第65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 第三章 朱砂叶螨HSP90基因克隆及表达 | 第67-111页 |
| 第一节 朱砂叶螨HSP90基因cDNA克隆及序列分析 | 第68-88页 |
| 1.材料和方法 | 第68-77页 |
| ·试验种群 | 第68页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第68-69页 |
| ·常用储备液及培养基的配制 | 第69-70页 |
| ·总RNA的提取 | 第70页 |
| ·朱砂叶螨HSP90基因片段扩增 | 第70-71页 |
| ·3′RACE扩增 | 第71-72页 |
| ·5′RACE扩增 | 第72-74页 |
| ·朱砂叶螨HSP90基因全序列 | 第74-75页 |
| ·目的片段的克隆和测序 | 第75-77页 |
| ·目的基因的生物信息学分析 | 第77页 |
| 2.结果分析 | 第77-87页 |
| ·朱砂叶螨总RNA的提取 | 第77页 |
| ·朱砂叶螨TcHSP90基因克隆 | 第77-78页 |
| ·朱砂叶螨TcHSP90基因序列分析 | 第78-81页 |
| ·朱砂叶螨TcHSP90基因同源性分析 | 第81-86页 |
| ·朱砂叶螨TcHSP90基因的SMART分析 | 第86-87页 |
| ·热激蛋白90家族进化关系 | 第87页 |
| 3 讨论 | 第87-88页 |
| 第二节 朱砂叶螨HSP90基因原核表达与鉴定 | 第88-103页 |
| 1 材料与方法 | 第89-99页 |
| ·宿主菌和质粒 | 第89页 |
| ·主要化学试剂与仪器设备 | 第89-91页 |
| ·实验方法 | 第91-99页 |
| ·表达载体构建的策略 | 第91页 |
| ·目的基因获得 | 第91-92页 |
| ·目的基因回收 | 第92-93页 |
| ·目的基因与pMDTM18-T Simple Vector的链接 | 第93页 |
| ·链接产物的转化与鉴定 | 第93页 |
| ·质粒抽提 | 第93-94页 |
| ·pSIMPLE-TcHSP90和pET-43.1a(+)载体酶切及连接 | 第94-95页 |
| ·pET43a-TcHSP90连接产物的转化及鉴定 | 第95-97页 |
| ·重组表达菌株的培养及表达 | 第97页 |
| ·Western印迹 | 第97-99页 |
| 2 结果分析 | 第99-101页 |
| ·TcHSP90基因的PCR扩增 | 第99-100页 |
| ·TcHSP90基因的克隆及鉴定 | 第100页 |
| ·pSIMPLE-TcHSP90的序列测定 | 第100页 |
| ·原核表达质粒的构建与鉴定 | 第100页 |
| ·pET43a-TcHSP90的诱导表达 | 第100页 |
| ·pET43a-TcHSP90表达产物的Western Blot检测 | 第100-101页 |
| 3 讨论 | 第101-103页 |
| 第三节 朱砂叶螨TcHSP90基因表达实时定量分析 | 第103-111页 |
| 1 材料与方法 | 第103-107页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·荧光实时定量PCR的原理 | 第104-105页 |
| ·方法 | 第105-107页 |
| ·引物设计及合成 | 第105页 |
| ·总RNA的提取、基因组DNA的去除及单链cDNA的合成 | 第105-106页 |
| ·real-time PCR条件的优化 | 第106页 |
| ·熔解曲线分析 | 第106页 |
| ·标准品的制备及标准曲线的建立 | 第106页 |
| ·朱砂叶螨TcHSP90基因mRNA定量检测 | 第106-107页 |
| ·数据分析 | 第107页 |
| 2 结果与分析 | 第107-109页 |
| ·总RNA的提取结果 | 第107-108页 |
| ·标准曲线 | 第108-109页 |
| ·高(低)温刺激后朱砂叶螨TcHSP90基因表达量 | 第109页 |
| ·阿维菌素处理后朱砂叶螨TcHSP90基因表达量 | 第109页 |
| 3 讨论 | 第109-111页 |
| 第四章 主要结论与创新点 | 第111-115页 |
| 1 主要研究结论 | 第111-114页 |
| 2 创新点 | 第114-115页 |
| 参考文献(REFERENCES) | 第115-132页 |
| 博士期间参加的科研项目及发表的论文目录 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
