| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| ·燃料乙醇的研究现状 | 第9页 |
| ·纤维素酶的研究概况 | 第9-14页 |
| ·纤维素酶系组成及催化机制 | 第9-11页 |
| ·纤维素酶的分子结构和性质 | 第11-12页 |
| ·产纤维素酶的微生物 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第13页 |
| ·内质网滞留信号序列的应用 | 第13-14页 |
| ·雄性不育基因的研究 | 第14-16页 |
| ·雄性不育的研究状况 | 第14-15页 |
| ·雄性不育的类型 | 第15页 |
| ·Barnase 基因的研究 | 第15-16页 |
| ·CRE／LOXP 重组系统 | 第16-18页 |
| ·Cre／loxp 重组系统的应用 | 第18页 |
| ·本论文研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-27页 |
| ·植物和真菌材料 | 第20页 |
| ·剪股颖和烟草的再生体系 | 第20页 |
| ·质粒和菌株 | 第20页 |
| ·酶和试剂 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·常用溶液的配制 | 第20-21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·基本实验方法 | 第21-27页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒DNA | 第21-22页 |
| ·PCR 反应 | 第22页 |
| ·质粒的限制性内切酶酶切反应 | 第22-23页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA 片断 | 第23页 |
| ·DNA 片断连接反应体系 | 第23页 |
| ·E.coli 感受态细胞的制备及转化 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第24页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·冻融法转化农杆菌LBA4404 | 第25页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第25页 |
| ·烟草叶盘法转化及再生 | 第25页 |
| ·植物总DNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·真菌总RNA 的提取 | 第26页 |
| ·逆转录PCR(RT-PCR) | 第26-27页 |
| 3 研究工作 | 第27-42页 |
| ·纤维素酶系基因的克隆 | 第27-32页 |
| ·材料和方法 | 第27-30页 |
| ·RT—PCR 扩增结果 | 第30-32页 |
| ·重组载体的构建与植物的转化 | 第32-38页 |
| ·内切葡聚糖苷酶（EGⅡ）基因表达载体的构建 | 第32-38页 |
| ·雄性不育基因(BARNASE)与热激诱导定位重组系统（CRE/LOXP)表达载体的构建 | 第38-42页 |
| ·材料与方法 | 第38页 |
| ·PIBC2 质粒和p3300-pHimes-35k 载体的酶切 | 第38-40页 |
| ·剪股颖愈伤组织的重组载体P3300 Crelox-05968-Barnase 农杆菌转化与鉴定 | 第40-42页 |
| 4 结论与讨论 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·载体构建中存在的问题 | 第42页 |
| ·RNA 提取中应注意的问题 | 第42页 |
| ·遗传转化的过程中的问题 | 第42页 |
| ·农杆菌介导剪股颖胚性愈伤组织转化的主要影响因素 | 第42-43页 |
| ·纤维素酶基因的拷贝数的问题 | 第43页 |
| ·Barnase 对细菌的致死作用 | 第43页 |
| ·结论 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
