| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-19页 |
| 一、鼠疫和鼠疫菌 | 第11-12页 |
| 二、鼠疫菌检测的研究概况 | 第12-15页 |
| 三、PCR 试剂稳定性的研究概况 | 第15-16页 |
| 参考文献 | 第16-19页 |
| 一、实验材料 | 第19-21页 |
| ·菌株及所用基因组DNA | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 二、实验方法 | 第21-28页 |
| ·细菌培养及细菌DNA 提取 | 第21页 |
| ·细菌培养 | 第21页 |
| ·细菌基因组 DNA 提取 | 第21页 |
| ·鼠疫菌实时定量PCR 引物和探针的设计与合成 | 第21-22页 |
| ·实时定量PCR 引物和探针以及克隆PCR 引物的初筛 | 第21-22页 |
| ·定量PCR 反应体系及程序的优化 | 第22-23页 |
| ·定量PCR 反应体系 | 第22-23页 |
| ·不同DNA 聚合酶比较 | 第23页 |
| ·引物和TaqMan 探针浓度的优化 | 第23页 |
| ·镁离子用量的优化 | 第23页 |
| ·反应程序的优化 | 第23页 |
| ·定量标准品及定量标准曲线的制备 | 第23-25页 |
| ·常规PCR 反应体系（25μl） | 第23页 |
| ·常规PCR 反应程序 | 第23页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第23-24页 |
| ·连接产物和T 载体 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第24页 |
| ·重组质粒的转化 | 第24页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第24页 |
| ·重组质粒小量提取 | 第24-25页 |
| ·制备定量标准品并计算其相应拷贝数 | 第25页 |
| ·特异性实验 | 第25页 |
| ·灵敏度实验 | 第25-26页 |
| ·试剂产品化及稳定性实验 | 第26页 |
| ·试剂产品化方法 | 第26页 |
| ·试剂产品化的稳定性评估 | 第26页 |
| ·模拟污染土壤样本实验 | 第26-27页 |
| ·模拟污染土壤样本的制备 | 第26-27页 |
| ·从模拟污染土壤样本中提取DNA 的处理步骤 | 第27页 |
| ·定量PCR 检测模拟污染土壤样本的灵敏度实验 | 第27页 |
| ·定量PCR 检测模拟污染土壤样本的特异性实验 | 第27页 |
| ·定量PCR 检测模拟污染土壤样本的盲测实验 | 第27页 |
| ·与国外同类试剂比较 | 第27-28页 |
| 三、实验结果 | 第28-35页 |
| ·定量PCR 反应体系、程序的优化 | 第28页 |
| ·定量标准曲线的制备 | 第28-29页 |
| ·特异性实验 | 第29-32页 |
| ·灵敏度实验 | 第32-33页 |
| ·试剂产品化的稳定性评价 | 第33-34页 |
| ·模拟污染土壤样本实验 | 第34页 |
| ·土壤样本的灵敏度实验 | 第34页 |
| ·土壤样本的特异性实验 | 第34页 |
| ·土壤样本的盲测实验 | 第34页 |
| ·与国外同类试剂比较 | 第34-35页 |
| 四、讨论 | 第35-37页 |
| 附录 | 第37-41页 |
| 附录1：荧光定量PCR 试剂考核实验原始记录 | 第37-41页 |
| 综述 | 第41-48页 |
| 鼠疫菌检测的研究进展 | 第41-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 个人简历 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49页 |