| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第11-43页 |
| 第一章 FCV反向遗传学的研究进展 | 第11-29页 |
| 1 猫杯状病毒分子生物学研究进展 | 第11-16页 |
| ·FCV的形态 | 第11-12页 |
| ·基因组结构 | 第12-13页 |
| ·RNA | 第13页 |
| ·结构蛋白 | 第13-14页 |
| ·非结构蛋白 | 第14-15页 |
| ·ORF3 | 第15页 |
| ·病毒的繁殖与复制 | 第15-16页 |
| 2 动物RNA病毒的反向遗传学 | 第16-24页 |
| ·概念与原理 | 第16-17页 |
| ·正链RNA病毒反向遗传学发展历程 | 第17-18页 |
| ·反向遗传学研究系统构建的策略 | 第18-20页 |
| ·反向遗传操作技术的应用与展望 | 第20-23页 |
| ·杯状病毒反向遗传学的应用 | 第23-24页 |
| 3 小结 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-29页 |
| 第二章 RHDV及VP60基因工程疫苗研究进展 | 第29-43页 |
| 1 兔出血症的基本特性 | 第29页 |
| 2 病毒基因组及重要结构和功能蛋白的特性 | 第29-33页 |
| ·RHDV基因组结构及其功能 | 第29-30页 |
| ·亚基因组 | 第30-31页 |
| ·结构蛋白 | 第31-32页 |
| ·非结构蛋白 | 第32-33页 |
| 3 VP60基因工程疫苗研究进展 | 第33-37页 |
| ·肠杆菌表达的亚单位疫苗 | 第33-34页 |
| ·杆状病毒-昆虫细胞系统表达的亚单位疫苗 | 第34-35页 |
| ·酵母重组亚单位疫苗 | 第35页 |
| ·转基因植物表达的亚单位疫苗 | 第35-36页 |
| ·重组病毒活载体疫苗 | 第36-37页 |
| 4 小结 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-43页 |
| 第二篇 试验研究 | 第43-83页 |
| 第一章 RNA聚合酶Ⅱ介导的FCV反向遗传操作系统的建立 | 第43-65页 |
| 1 材料 | 第43-44页 |
| ·细胞及培养基 | 第43-44页 |
| ·载体与质粒 | 第44页 |
| ·酶和试剂 | 第44页 |
| ·仪器设备 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-53页 |
| ·FCV全长的扩增及遗传标记的引入 | 第44-45页 |
| ·PCR | 第45页 |
| ·pcDNA3载体的改造 | 第45-46页 |
| ·PCR产物的连接、转化与阳性克隆质粒的鉴定 | 第46-48页 |
| ·连接产物的转化 | 第48-49页 |
| ·全基因组真核表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·病毒的拯救 | 第50-51页 |
| ·感染性克隆的鉴定 | 第51-53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| ·FCV全长的扩增 | 第53-54页 |
| ·pcDNA3载体的改造 | 第54-55页 |
| ·核酶的引入 | 第55页 |
| ·全基因组感染性克隆的构建 | 第55-56页 |
| ·转染敏感细胞 | 第56-57页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第57页 |
| ·拯救毒与亲本毒的区别鉴定 | 第57-58页 |
| ·拯救毒与亲本毒复制动力学比较 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| ·RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)介导的拯救系统 | 第59页 |
| ·影响病毒转录体感染性的主要因素 | 第59-60页 |
| ·体内转染时各参数的影响 | 第60-61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 第二章 RHDV VP60在F81细胞中的表达 | 第65-83页 |
| 1 材料 | 第65-66页 |
| ·细胞及培养条件 | 第65-66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66页 |
| ·仪器设备 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-71页 |
| ·嵌合体病毒载体的构建 | 第66-68页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第68-69页 |
| ·转染敏感细胞 | 第69页 |
| ·VP60的表达 | 第69-70页 |
| ·表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第70-71页 |
| 3 结果 | 第71-77页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第71-74页 |
| ·嵌合体病毒VP60的表达 | 第74-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 5 小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
| 全文总结 | 第83-85页 |
| 附录 实验所需试剂配制 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |