| SUMMARY IN CHINESE(中文摘要) | 第1-16页 |
| SUMMARY IN FRENCH(RESUME) | 第16-18页 |
| SUMMARY | 第18-20页 |
| ABREVIATIONS | 第20-23页 |
| CHAPTER 1 GENERAL INTRODUCTION | 第23-95页 |
| 1.DIFFERENT HELICASE FAMILIES | 第25-32页 |
| SUPERFAMILY 1 | 第26页 |
| SUPERFAMILY 2 | 第26-27页 |
| SUPERFAMILY 3 | 第27-29页 |
| SUPERFAMILY 4 | 第29-31页 |
| OTHER SUPERFAMILIES | 第31-32页 |
| 2.HELICASE-GENERAL PROPERTIES OF HELICASES AND MODE OF ACTION | 第32-39页 |
| ·BIOCHEMICAL PROPERTIES OF HELICASES | 第32-37页 |
| ·NTP binding and hydrolysis of NTP | 第32页 |
| ·Nucleic Acids binding | 第32-33页 |
| ·Unwinding Activity and Mode of Action | 第33-36页 |
| ·Annealing Activity | 第36-37页 |
| ·THE MULTIPLE FUNCTIONS OF HELICASES | 第37-39页 |
| Helicase and DNA replication | 第37-38页 |
| Helicase and DNA repair | 第38页 |
| Helicase and RNA metabolism | 第38-39页 |
| 3.THE RECQ FAMILY OF DNA HELICASES | 第39-75页 |
| ·GENERAL FEATURES AND STRUCTURAL ORGANISATION | 第39-44页 |
| ·THE ESCHERICHIA COLI RECQ | 第44-48页 |
| ·Genetic Background | 第44页 |
| ·Biochemical and structural Properties of E.coli RecQ | 第44-45页 |
| ·Role in genomic stability | 第45-48页 |
| ·RecQ helicases from other microorganisms | 第48页 |
| ·YEAST RECQ FAMILY HELICASES | 第48-52页 |
| ·Saccharomyces cerevisiae Sgs1 | 第48-51页 |
| ·Sgs1 Cellular Phenotype | 第48-49页 |
| ·Biochemical Properties of Sgs1 | 第49页 |
| ·Interaction Partners and Models for genome instability | 第49-51页 |
| ·Schizosaccharomyces pombe Rqh1 | 第51-52页 |
| ·Biochemical properites | 第51页 |
| ·Function in telomere metabolism | 第51-52页 |
| ·RECQ HELICASES IN HUMAN | 第52-75页 |
| ·Human RECQ1 | 第52-56页 |
| Human RECQ1 and gienome stability | 第52-55页 |
| Biochemical properties | 第55页 |
| Structure of human RECQ1 | 第55-56页 |
| ·BLM-The Bloom Syndrome Helicase | 第56-62页 |
| Bloom's Syndrome(BS) | 第56-58页 |
| BS Ciellular Phenotype | 第58页 |
| BLM protein and its interaction partners | 第58-62页 |
| ·WRN-The Werner Syndrome Helicase | 第62-67页 |
| The Wierner Syndrome | 第62-63页 |
| WS Cellular Phenotype | 第63-65页 |
| WRN protein and its interaction partners | 第65-67页 |
| ·RECQ4/RTS-The Rothmund-Thomson Syndrome Protein | 第67-71页 |
| The Rothmaund-Thomson Syndrome(RTS) | 第67-68页 |
| RTS Cellular Phenotype | 第68-69页 |
| RECQ4 protein | 第69-71页 |
| ·RECQ5 | 第71-75页 |
| Discovery of RECQ5 | 第71-72页 |
| Biochemical properties of RECQ5 | 第72-75页 |
| RECQ5 and SCEs | 第75页 |
| 4.PROPOSE | 第75-78页 |
| ·THE ENZYMATIC REGULATION ROLE OF ZINC FINGER MOTIF IN RECQ FAMILY HELICASE | 第75-76页 |
| ·THE FUNCTIONAL ASPECTS OF HRDC DOMAIN IN RECQ HELICASE FAMILY | 第76页 |
| ·THE SPECIAL STRUCTURAL FEATURE OF ARGININE FINGER IN RECQ FAMILY HELICASE | 第76-78页 |
| REFERENCES | 第78-95页 |
| CHAPTER 2 RESULTS | 第95-219页 |
| Ⅰ ZINC BINDING MOTIF IN RECQ5B ACTS AS A MOLECULAR SWITCH TURNING STRAND ANNEALING INTO DNA UNWINDING | 第96-128页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第97-98页 |
| SUMMARY | 第98-99页 |
| INTRODUCTION | 第99-102页 |
| MATERIALS AND METHODS | 第102-109页 |
| PROTEINS AND DNA SUBSTRATES | 第102-105页 |
| QUANTIFICATION OF THE PROTEIN-BOUND ZN~(2+) IONS | 第105页 |
| ATP BINDING ASSAY | 第105-106页 |
| ATPASE ASSAY | 第106页 |
| DNA BINDING ASSAY | 第106-107页 |
| DNA HELICASE ACTIVITY ASSAY | 第107-108页 |
| DNA STRAND-ANNEALING ASSAY | 第108-109页 |
| RESULTS AND DISSCUSSION | 第109-124页 |
| RECQ5 HELICASE DOMAIN ALONE CATALYZES STRAND ANNEALING,BUT NOT STRAND SEPARATION | 第109-116页 |
| THE RECQ5 HELICASE DOMAIN BINDS ATP EFFICIENTL Y,BUT DISPLAYS A POOR ATPASE ACTIVITY | 第116-117页 |
| A ZINC-BINDING MOTIF IS ESSENTIAL FOR THE HELICASE ACTIVITY OF RECQ5B | 第117-120页 |
| MOLECULAR MECHANISM OF INTRAMOLECULAR STIMULATION OF CATALYTIC ACTIVITY MEDIATED BY THE ZINC BINDING MOTIF | 第120-121页 |
| MODEL FOR THE ROLE OF THE ZINC-BINDING MOTIF IN THE FUNCTION OF RECQ HELICASES | 第121-124页 |
| CONCLUDING REMARKS | 第124-125页 |
| REFERENCES | 第125-128页 |
| Ⅱ BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF HELICASE ACTIVITY AND DNA SUBSTRATE SPECIFICITY OF BACILLUS SUBTILIS RECQ HELICASES | 第128-174页 |
| ACKNOWLEDGEMENT | 第129-130页 |
| SUMMARY | 第130-131页 |
| INTRODUCTON | 第131-133页 |
| MATERIALS AND METHODS | 第133-141页 |
| REAGENTS | 第133页 |
| NULEIC ACID SUBSTRATES | 第133页 |
| TEMPLATE SELECTION AND AMINO ACID SEQUENCE ALIGNMENT | 第133-136页 |
| PROTEIN EXPRESSION | 第136-137页 |
| PROTEIN PURIFICATION | 第137页 |
| QUANTIFICATION OF ZINC ION BOUND TO SUBL AND SUBS HELICASES | 第137-138页 |
| SIZE EXCLUSION CHROMATOGRAPHY OF SUBL | 第138页 |
| ATPASE ASSAY | 第138页 |
| DNA HELICASE ASSAY | 第138-139页 |
| PROTEIN-DNA BINDING ASSAY BY EMSA | 第139页 |
| DNA STRAND-ANNEALING AND STRAND-EXCHANGE ASSAY | 第139-141页 |
| RESULTS | 第141-165页 |
| MOLECULAR MODELLING | 第141-143页 |
| CLONING,PRODUCTION AND PURIFICATION OF RECQ HELICASE FROM BACILLUS SUBTILIS | 第143-145页 |
| DNA-DEPENDENT ATPASE ACTIVITY | 第145-148页 |
| DNA UNWINDING ACTIVITIES ASSAY VERSUS B.SUBTILIS RECQ HELICASES CONCENTRATION | 第148页 |
| POLARITY AND PROCESSIVITY OF THE B.SUBTILIS RECQ HELICASES | 第148-153页 |
| B.SUBTILIS RECQ HELICASE ACTIVITY ON BLUNT-ENDED AND GAPPED DNA SUBSTRATES | 第153-155页 |
| B.SUBTILIS RECQ HELICASE ACTIVITY ON FORKED DUPLEX DNA WITH INCREASING 3' AND 5'-TAIL LENGTH | 第155页 |
| B.SUBTILIS RECQ HELICASES TARGET DNA REPLICATION AND REPAIR INTERMEDIATES | 第155-160页 |
| BINDING OF THE PUTATIVE B.SUBTILIS RECQ TO DNA SUBSTRATES | 第160-162页 |
| B.SUBTILIS RECQ HELICASES POSSESS DNA STRAND-ANNEALING ACTIVITY AND PROMOTE DNA EXCHANGE WEAKLY | 第162-165页 |
| DISCUSSION | 第165-170页 |
| REFERENCES | 第170-174页 |
| Ⅲ.THE ARGININE FINGER OF THE BLOOM SYNDROME PROTEIN:ITS STRUCTURAL ORGANIZATION AND ITS ROLE IN ENERGY COUPLING | 第174-219页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第175-176页 |
| SUMMARY | 第176-177页 |
| INTRODUCTION | 第177-182页 |
| MATERIALS AND METHODS | 第182-189页 |
| PLASMID CONSTRUCTION AND SITE-DIRECTED MUTAGENESIS | 第182页 |
| PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION | 第182-183页 |
| DNA SUBSTRATES PREPARATION | 第183页 |
| ATPASE ASSAY | 第183-184页 |
| DNA UNWINDING ACTIVITY ASSAY | 第184-185页 |
| DNA BINDING ASSAY | 第185-186页 |
| DNA ANNEALING ACTIVITY BY EMSA | 第186页 |
| ATP-BINDING ASSAYS | 第186-188页 |
| PREPARATION OF ORTHOVANADATE SOLUTIONS | 第188-189页 |
| RESULTS | 第189-211页 |
| DESIGN,EXPRESSION,AND PURIFICATION OF BLM MUTATIONS | 第189-191页 |
| VI INHIBITS AND UNCOUPLES ATPASE AND DNA UNWINDING ACTIVITIES OF BLM | 第191-194页 |
| HELICASE AND ATPASE ACTIVITIES OF THE MUTANT ENZYMES | 第194-199页 |
| ALL MUTANTS DISPLAY NORMAL ATP AND DNA BINDING ABILITIES | 第199-206页 |
| ARGININE RESIDUES MUTANTS DISPLAY NORMAL ANNEALING ABILITIES | 第206-207页 |
| VI INHIBITION STUDY REVEALS THAT R982 FUNCTIONS AS AN ARGININE FINGER | 第207-211页 |
| DISCUSSION | 第211-216页 |
| REFERENCES | 第216-219页 |
| CHAPTER 3 GENERAL CONCLUSION AND PERSPECTIVE | 第219-225页 |
| 1 THE SPECIAL FUNCTION OF ZINC BINDING MOTIF IN RECQ FAMILY HELICASES | 第220-221页 |
| 2 THE FUNCTION OF THE HRDC DOMAIN IN RECQ HELICASE FAMILY | 第221-222页 |
| 3 THE SPECIAL STRUCTURAL FEATURE OF ARGININE FINGER OF RECQ FAMILY HELICASE | 第222页 |
| 4 PERSPECTIVE | 第222-224页 |
| REFERENCES | 第224-225页 |
| CHAPTER 4 APPENDIXES | 第225-244页 |
| Ⅰ.MATERIALS AND METHODS | 第226-244页 |
| 1.PLASMIDS CONSTRUCTION | 第226-232页 |
| A.PCR AND GEL EXTRACTION | 第226-227页 |
| REAGENTS AND INSTRUMENTS | 第226页 |
| PROTOCOL | 第226-227页 |
| B.PLASMID CONSTRUCTION | 第227-232页 |
| REAGENTS AND INSTRUMENTS | 第227-228页 |
| PROTOCOL | 第228-232页 |
| 2.PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION | 第232-235页 |
| REAGENTS AND INSTRUMENTS | 第232-233页 |
| PROTOCOL | 第233-235页 |
| 3.WESTERN BLOT | 第235-238页 |
| REAGENTS AND INSTRUMENTS | 第235-236页 |
| PROTOCOL | 第236-238页 |
| 4.ATPASE ACTIVITY | 第238-239页 |
| REAGENTS AND INSTRUMENTS | 第238页 |
| PROTOCOL | 第238-239页 |
| 5.HELICASE ACTIVITY EXAMINATION | 第239-242页 |
| REAGENTS AND INSTRUMENTS | 第239-240页 |
| PROTOCOL | 第240-242页 |
| 6.DETERMINE ZINC ION CONCENTRATION OF HELICASE | 第242-244页 |
| REAGENTS AND INSTRUMENTS | 第242页 |
| PROTOCOL | 第242-244页 |
| Ⅱ.LIST OF PUBLICATIONS | 第244页 |
