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深海耐压细菌Shewanella piezotolerans WP3丝状噬菌体SW1低温诱导调控机制及硫修饰生理学功能研究

摘要第3-6页
ABSTRACT第6-8页
缩写词说明第9-14页
第一章 绪论第14-53页
    1.1 深海噬菌体的研究概述第14-20页
        1.1.1 深海的环境特点第14页
        1.1.2 深海原核生物的多样性第14-17页
        1.1.3 深海噬菌体的丰度和多样性第17页
        1.1.4 深海噬菌体的生态学功能第17-19页
        1.1.5 深海噬菌体的分离鉴定第19-20页
    1.2 丝状噬菌体的研究概况第20-26页
        1.2.1 丝状噬菌体的分布第20-21页
        1.2.2 丝状噬菌体基因的结构和功能第21-23页
        1.2.3 丝状噬菌体对宿主生理及环境适应性的影响第23-26页
    1.3 深海丝状噬菌体SW1 及其宿主Shewanella piezotolerans WP3 研究进展第26-30页
        1.3.1 Shewanella piezotolerans WP3 研究概况第26-28页
        1.3.2 深海丝状噬菌体SW1 研究概况第28-30页
    1.4 溶源性噬菌体的诱导机制研究进展第30-33页
        1.4.1 大肠杆菌噬菌体λ的诱导机制第30-31页
        1.4.2 霍乱弧菌丝状噬菌体CTXΦ的诱导机制第31-32页
        1.4.3 噬菌体λ与 CTXΦ基因开关的比较第32-33页
    1.5 DNA磷硫酰化修饰的研究进展第33-48页
        1.5.1 天然状态下存在的DNA修饰类型第33-34页
        1.5.2 DNA甲基化修饰的生理功能第34-37页
        1.5.3 DNA磷硫酰化修饰的发现与鉴定第37-40页
        1.5.4 DNA磷硫酰化修饰的特点第40-41页
        1.5.5 DNA磷硫酰化修饰的分布第41-43页
        1.5.6 Dnd蛋白的功能研究第43-44页
        1.5.7 DNA磷硫酰化修饰的生理功能研究第44-47页
        1.5.8 对DNA磷硫酰化修饰的生物学意义的认识和思考第47-48页
    1.6 抗氧化能力对于微生物极端环境适应性的影响第48-50页
        1.6.1 微生物体内的抗氧化系统第48-49页
        1.6.2 多种极端环境可以引起氧化胁迫第49-50页
    1.7 本论文的研究意义和主要内容第50-53页
        1.7.1 本研究的意义第50-51页
        1.7.2 本研究的主要内容第51-53页
第二章 材料与方法第53-70页
    2.1 实验材料第53-63页
    2.2 实验方法第63-70页
第三章 噬菌体SW1 自身调控蛋白FpsR的功能鉴定第70-96页
    3.1 前言第70-71页
    3.2 实验结果与讨论第71-93页
        3.2.1 FpsR蛋白的生物信息学分析第71-72页
        3.2.2 fpsR基因缺失突变体的构建第72-74页
        3.2.3 fpsR基因缺失对SW1 基因表达的影响第74-81页
        3.2.4 His标签FpsR蛋白的纯化与表达第81-85页
        3.2.5 EMSA分析FpsR与 SW1 启动子区的相互作用第85-88页
        3.2.6 DNase I Foot-printing确定FpsR结合位点及后续验证第88-90页
        3.2.7 温度对于FpsR结合能力的影响第90-92页
        3.2.8 FpsR蛋白的系统发育分析第92-93页
    3.3 小结与展望第93-96页
        3.3.1 小结与讨论第93-95页
        3.3.2 展望第95-96页
第四章 S.piezotolerans WP3转录调控因子H-NS对 SW1 基因表达的调控作用第96-118页
    4.1 前言第96-97页
    4.2 实验结果与讨论第97-115页
        4.2.1 His标签H-NS蛋白的异源表达第97-98页
        4.2.2 H-NS对于WP3 侧生鞭毛系统的调控作用第98-103页
        4.2.3 hns基因缺失突变体以及hns、fpsR双突变体的构建第103-104页
        4.2.4 hns的缺失对噬菌体SW1 基因表达的影响第104-106页
        4.2.5 hns的缺失对噬菌体DNA复制的影响第106-108页
        4.2.6 体外实验验证H-NS与 SW1 启动子区域的互作第108-112页
        4.2.7 hns以及fpsR双突变对噬菌体SW1 基因表达的影响第112-114页
        4.2.8 噬菌体SW1 低温诱导的调控回路第114-115页
    4.3 小结与展望第115-118页
        4.3.1 小结与讨论第115-117页
        4.3.2 展望第117-118页
第五章 DNA硫修饰影响噬菌体SW1 的基因表达第118-142页
    5.1 前言第118-119页
    5.2 实验结果与讨论第119-139页
        5.2.1 dnd基因簇的克隆与硫修饰菌株构建第119-122页
        5.2.2 硫修饰对噬菌体SW1 基因表达的影响第122-125页
        5.2.3 硫修饰位点突变后硫修饰对SW1 基因表达的影响第125-129页
        5.2.4 敲除fpsR基因后硫修饰对SW1 基因表达的影响第129-132页
        5.2.5 硫修饰对于完整噬菌体SW1 的基因表达影响第132-135页
        5.2.6 EMSA分析FpsR与硫修饰DNA的结合能力第135-136页
        5.2.7 ITC分析FpsR与硫修饰DNA的结合能力第136-137页
        5.2.8 硫修饰与噬菌体基因偶联示例第137-139页
    5.3 小结与展望第139-142页
        5.3.1 小结与讨论第139-141页
        5.3.2 展望第141-142页
第六章 DNA硫修饰提升微生物对多重极端条件的耐受能力第142-173页
    6.1 前言第142-143页
    6.2 实验结果与讨论第143-169页
        6.2.1 WP3 硫修饰菌株对不同胁迫条件抵抗能力的检测第143-149页
        6.2.2 不同胁迫条件下dnd基因表达水平检测第149-150页
        6.2.3 Hpx—硫修饰菌株对不同胁迫条件抵抗能力的检测第150-155页
        6.2.4 氧化监测探针检测硫修饰菌株在胁迫条件下胞内氧化状态第155-160页
        6.2.5 Hpx~-硫修饰菌株清除过氧化氢实验第160-162页
        6.2.6 高温下WP3 硫修饰菌株生长缺陷原因分析第162-165页
        6.2.7 硫修饰限制修饰系统的进化分析第165-169页
    6.3 小结与展望第169-173页
        6.3.1 小结与讨论第169-172页
        6.3.2 展望第172-173页
第七章 全文总结与展望第173-177页
    结论和创新点第173-175页
    实验展望第175-177页
参考文献第177-196页
附录第196-229页
    附录1 pET-24a-d(+)表达质粒图谱第196-197页
    附录2 pET-28a表达质粒图谱第197-198页
    附录3 pSW2 回补质粒图谱第198-199页
    附录4 pRE112 自杀质粒图谱第199-200页
    附录5 DNA及蛋白分子量标准第200-201页
    附录6 NCBI数据库中基因组中具有硫修饰基因簇的原核生物名目第201-221页
    附录7 病毒宏基因组中dndE基因数目统计第221-229页
学术论文与科研成果第229-231页
致谢第231-234页

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