| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 骨肉瘤流行病学 | 第13页 |
| 1.2 骨肉瘤病理学 | 第13-15页 |
| 1.3 相关信号通路 | 第15-23页 |
| 1.3.1 PI3K/AKT信号通路 | 第16-17页 |
| 1.3.2 Notch信号通路 | 第17-20页 |
| 1.3.3 Wnt/β-Catenin信号通路 | 第20-21页 |
| 1.3.4 癌症中EMT与 PI3K/AKT通路、Notch通路以及Wnt/β-Catenin通路的关系 | 第21-23页 |
| 第二章 COX2 高表达骨肉瘤MG63 细胞株的构建 | 第23-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-34页 |
| 2.1.1 所需细胞 | 第23页 |
| 2.1.2 试剂仪器 | 第23-25页 |
| 2.1.3 细胞培养 | 第25-26页 |
| 2.1.4 pAdTrack-COX2 腺病毒穿梭质粒的构建 | 第26-30页 |
| 2.1.5 Western bloting检测各组细胞COX2 蛋白表达 | 第30-32页 |
| 2.1.6 qPCR检测各组细胞COX2 mRNA表达 | 第32-34页 |
| 2.1.7 数据统计 | 第34页 |
| 2.2 结果 | 第34-36页 |
| 2.2.1 腺病毒载体感染MG63 细胞的荧光观察 | 第34-35页 |
| 2.2.2 COX2 高表达MG63 细胞构建成功的检测 | 第35-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 COX2 诱导MG63 细胞侵袭迁移 | 第38-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-42页 |
| 3.1.1 所需细胞 | 第38页 |
| 3.1.2 材料仪器 | 第38-39页 |
| 3.1.3 细胞培养 | 第39页 |
| 3.1.4 细胞增殖实验 | 第39-40页 |
| 3.1.5 细胞迁移实验 | 第40页 |
| 3.1.6 细胞侵袭实验 | 第40页 |
| 3.1.7 Western bloting实验检测MG63 细胞中β-Catenin、Snail1、vimentin、E-cadherin蛋白表达 | 第40-41页 |
| 3.1.8 qPCR实验检测各组细胞中β-Catenin、Snail1、vimentin、E-cadherin mRNA表达 | 第41页 |
| 3.1.9 ELISA实验检测各组细胞上清中MMP2、MMP9、VEGF含量变化 | 第41-42页 |
| 3.1.10 统计学方法 | 第42页 |
| 3.2 结果 | 第42-49页 |
| 3.2.1 各组细胞增殖变化 | 第42-43页 |
| 3.2.2 各组细胞迁移能力的变化 | 第43-44页 |
| 3.2.3 各组细胞β-Catenin、Snail1、vimentin、E-cadherin蛋白表达的变化 | 第44-46页 |
| 3.2.4 各组细胞vimentin、E-cadherin、β-Catenin、Snail1 mRNA表达的变化 | 第46-48页 |
| 3.2.5 各组细胞上清中MMP2、MMP9、VEGF含量变化 | 第48-49页 |
| 3.3 讨论 | 第49-53页 |
| 第4章 COX2 通过PI3K/AKT/NF-κB/Notch1/Wnt途径诱导骨肿瘤细胞迁移侵袭 | 第53-80页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-56页 |
| 4.1.1 所需细胞 | 第53页 |
| 4.1.2 材料仪器 | 第53-54页 |
| 4.1.3 细胞培养及分组 | 第54页 |
| 4.1.4 细胞增殖实验 | 第54页 |
| 4.1.5 细胞迁移侵袭实验 | 第54页 |
| 4.1.6 ELISA实验检测各组细胞上清中MMP2、MMP9、VEGF含量变化 | 第54页 |
| 4.1.7 Western bloting实验检测各组细胞中β-Catenin、Snail1、Vimentin、E-cadherin、PI3K、p-PI3K、Notch1、Wnt、AKT、p-AKT、IKK、p-IKK、NF-κB、GSK-3β、β-Catenin蛋白表达量 | 第54页 |
| 4.1.8 qPCR实验检测各组细胞中β-Catenin、Snail1、Vimentin、E-cadherin、Notch Wnt、Gsk-3βmRNA表达量 | 第54-55页 |
| 4.1.9 免疫荧光 | 第55-56页 |
| 4.1.10 统计学方法 | 第56页 |
| 4.2 结果 | 第56-74页 |
| 4.2.1 各组细胞迁移的变化 | 第56-57页 |
| 4.2.2 各组细胞侵袭的变化 | 第57-58页 |
| 4.2.3 各组细胞上清中MMP2、MMP9、VEGF含量的变化 | 第58-60页 |
| 4.2.4 各组细胞中β-Catenin、Snail1、Vimentin、E-cadherin蛋白含量的变化 | 第60-62页 |
| 4.2.5 各组细胞中β-Catenin、Snail1、Vimentin、E-cadherin mRNA含量的变化 | 第62-63页 |
| 4.2.6 各组细胞中PI3K、p-PI3K、Notch1、Wnt蛋白变化 | 第63-66页 |
| 4.2.7 各组细胞中AKT、p-AKT、IKK、p-IKK、Notch1 蛋白的变化 | 第66-68页 |
| 4.2.8 各组细胞中NF-κB(p65)核转移情况 | 第68-69页 |
| 4.2.9 各组细胞中Notch1 mRNA变化 | 第69-70页 |
| 4.2.10 各组细胞中Wnt、GSK-3β蛋白变化 | 第70-71页 |
| 4.2.11 细胞核中 β-Catenin蛋白含量的变化 | 第71-73页 |
| 4.2.12 各组细胞中Wnt、Gsk-3β m RNA变化 | 第73-74页 |
| 4.3 讨论 | 第74-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 缩略词 | 第88-89页 |
| 附录 | 第89-100页 |
| 在校期间的研究成果 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
