| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 水稻稻瘟病简介 | 第13-14页 |
| 1.2 真核生物启动子研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 组成型启动子 | 第15-16页 |
| 1.2.2 诱导型启动子 | 第16页 |
| 1.2.3 时空启动子 | 第16-17页 |
| 1.2.4 合成启动子 | 第17-18页 |
| 1.3 顺式作用元件的研究方法 | 第18-19页 |
| 1.4 抗病同源基因 | 第19页 |
| 1.5 本研究的内容及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 Pi63启动子调控功能分析 | 第21-51页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料与方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2.2 载体和菌株 | 第21-22页 |
| 2.2.3 主要试剂及配方 | 第22-26页 |
| 2.2.3.1 实验试剂 | 第22页 |
| 2.2.3.2 主要试剂配方 | 第22-24页 |
| 2.2.3.3 主要培养基及其配方表 | 第24-26页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方案 | 第27-38页 |
| 2.3.1 表达载体的构建 | 第27-31页 |
| 2.3.1.1 启动子区域的划分 | 第27页 |
| 2.3.1.2 目的片段的扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.1.3 目的片段的凝胶回收 | 第28页 |
| 2.3.1.4 提取pCAMBIA1391Z和pMD C99的质粒DNA | 第28-29页 |
| 2.2.1.5 对含有不同顺式作用元件的目的片段及载体进行双酶切 | 第29页 |
| 2.3.1.6 酶切产物的纯化 | 第29页 |
| 2.2.1.7 重组质粒的连接 | 第29-30页 |
| 2.3.1.8 热激转化 | 第30页 |
| 2.2.1.9 电激转化 | 第30页 |
| 2.3.1.10 重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.2 农杆菌介导的水稻愈伤组织遗传转化 | 第31-33页 |
| 2.3.2.1 水稻愈伤组织诱导 | 第31页 |
| 2.2.2.2 农杆菌的活化 | 第31-32页 |
| 2.3.2.3 农杆菌与愈伤组织共培养 | 第32页 |
| 2.3.2.4 抗性愈伤的筛选 | 第32页 |
| 2.3.2.5 抗性愈伤的分化 | 第32页 |
| 2.2.2.6 转基因植株的生根及幼苗移栽 | 第32-33页 |
| 2.3.3 鉴定阳性植株 | 第33-34页 |
| 2.3.3.1 植物DNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.3.4 GUS组织化学染色 | 第34页 |
| 2.3.5 GUS酶活性检测 | 第34-36页 |
| 2.3.5.1 新鲜水稻组织总蛋白的提取 | 第34页 |
| 2.3.5.2 考马斯亮蓝法测定总蛋白含量 | 第34-35页 |
| 2.3.5.3 GUS酶活反应 | 第35页 |
| 2.3.5.4 GUS荧光定量分析 | 第35-36页 |
| 2.3.6 转基因T_1代植株拷贝数鉴定 | 第36页 |
| 2.3.6.1 标准曲线制作 | 第36页 |
| 2.3.6.2 转基因T_1代植株拷贝数鉴定 | 第36页 |
| 2.3.7 转基因T_1代植株表达量检测 | 第36-38页 |
| 2.3.7.1 稻瘟病菌种活化及孢子悬浮液的制备 | 第37页 |
| 2.3.7.2 T_1代阳性植株的接种试验 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-48页 |
| 2.4.1 表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.4.2 水稻遗传转化 | 第39-40页 |
| 2.4.3 转基因T_0代植株的阳性鉴定 | 第40-42页 |
| 2.4.4 GUS组织化学染色 | 第42-43页 |
| 2.4.5 GUS酶活性检测 | 第43-44页 |
| 2.4.6 转基因T_1代植株阳性鉴定 | 第44-45页 |
| 2.4.7 转基因T_1代植株拷贝数鉴定 | 第45-46页 |
| 2.4.7.1 标准曲线制作 | 第45页 |
| 2.4.7.2 T_1代转基因植株目的基因的拷贝数计算 | 第45-46页 |
| 2.4.8 转基因T_1代植株接种前后表达量 | 第46-48页 |
| 2.5 讨论 | 第48-51页 |
| 第三章 稻瘟病抗性基因Pi63同源基因的克隆及抗性初步研究 | 第51-63页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 材料与方法 | 第51-52页 |
| 3.2.3 主要试剂及配方 | 第51-52页 |
| 3.2.3.1 实验试剂 | 第51-52页 |
| 3.2.3.2 主要试剂配方 | 第52页 |
| 3.2.3.3 主要培养基及其配方表 | 第52页 |
| 3.2.4 主要仪器设备 | 第52页 |
| 3.3 实验方案 | 第52-57页 |
| 3.3.1 稻瘟病抗性基因Pi63同源基因的克隆 | 第52-53页 |
| 3.3.2 同源基因载体构建 | 第53-56页 |
| 3.3.2.1 目的片段的凝胶回收 | 第53页 |
| 3.3.2.2 提取pMD C99的质粒DNA | 第53页 |
| 3.3.2.3 目的片段及载体双酶切 | 第53-54页 |
| 3.3.2.4 重组质粒的连接 | 第54页 |
| 3.3.2.5 热激转化 | 第54-55页 |
| 3.3.2.6 重组质粒的鉴定 | 第55页 |
| 3.3.2.7 农杆菌EHA105电击感受态制备 | 第55-56页 |
| 3.3.2.8 同源基因载体电击转化农杆菌 | 第56页 |
| 3.3.2.9 电转农杆菌阳性鉴定 | 第56页 |
| 3.3.4 水稻遗传转化 | 第56页 |
| 3.3.5 转基因植株T_0代植株阳性鉴定 | 第56-57页 |
| 3.3.5.1 转基因植株基因组DNA的提取 | 第56页 |
| 3.3.5.2 转基因植株的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 3.3.6 T_0代转基因植株离体接种 | 第57页 |
| 3.3.6.1 稻瘟病菌种活化及孢子悬浮液的制备 | 第57页 |
| 3.3.6.2 T_0代转基因植株离体接种稻瘟病菌种007 | 第57页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第57-61页 |
| 3.4.1 目的片段的PCR扩增 | 第57-58页 |
| 3.4.2 重组质粒阳性鉴定 | 第58页 |
| 3.4.3 水稻遗传转化 | 第58-59页 |
| 3.4.4 同源基因转基因T_0代植株的阳性鉴定 | 第59-60页 |
| 3.4.5 同源基因转基因T_0代植株离体接种 | 第60-61页 |
| 3.5 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第69页 |
| 参与的科研课题 | 第69页 |
| 参与的学术会议 | 第69页 |
