| 课题来源 | 第2-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 PRRSV的起源 | 第11-12页 |
| 2 PRRSV的流行状况 | 第12页 |
| 3 病毒生物学研究 | 第12-13页 |
| 4 病毒基因组组成 | 第13-14页 |
| 5 病毒变异 | 第14-15页 |
| 6 病毒基因重组 | 第15页 |
| 7 病毒复制 | 第15-16页 |
| 8 结构蛋白与非结构蛋白 | 第16-17页 |
| 8.1 PRRSV主要结构蛋白 | 第16页 |
| 8.2 PRRSV非结构蛋白 | 第16-17页 |
| 9 非结构蛋白Nsp2的生物学特性 | 第17页 |
| 10 非结构蛋白Nsp2对病毒复制及致病性方面 | 第17-20页 |
| 缩略词表 | 第20-21页 |
| 第一章 PRRSV的临床病例诊断 | 第21-34页 |
| 1 材料 | 第21-24页 |
| 1.1 主要材料 | 第21页 |
| 1.1.1 病料来源 | 第21页 |
| 1.2 试剂 | 第21-22页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第22-24页 |
| 2 方法 | 第24-27页 |
| 2.1 临床调查 | 第24页 |
| 2.2 剖检变化 | 第24页 |
| 2.3 RT-PCR检测 | 第24-26页 |
| 2.3.1 提取RNA | 第24-25页 |
| 2.3.2 RT-PCR | 第25页 |
| 2.3.3 电泳 | 第25-26页 |
| 2.4 病理切片制作 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-33页 |
| 3.1 临床症状 | 第27-29页 |
| 3.2 解剖结果 | 第29-30页 |
| 3.3 RT-PCR结果 | 第30-31页 |
| 3.4 病理学检测结果 | 第31-33页 |
| 4 讨论 | 第33页 |
| 5 小结 | 第33-34页 |
| 第二章 贵州流行PRRSV毒株GZ-RNSP2序列分析 | 第34-49页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| 1.1 主要材料 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2 方法 | 第35-39页 |
| 2.1 引物设计 | 第35页 |
| 2.2 提取样本总RNA | 第35-36页 |
| 2.3 cDNA的合成 | 第36-37页 |
| 2.4 PRRSVNSP2基因PCR扩增 | 第37页 |
| 2.5 PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳观察结果 | 第37页 |
| 2.6 PRRSVNSP2基因克隆及测序 | 第37-39页 |
| 2.6.1 目的基因片段纯化回收 | 第37-38页 |
| 2.6.2 连接 | 第38页 |
| 2.6.3 转化 | 第38-39页 |
| 2.6.4 克隆质粒的鉴定 | 第39页 |
| 2.6.5 基因序列对比分析 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-47页 |
| 3.1 GZ-RNSP2基因PCR扩增结果 | 第39-40页 |
| 3.2 GZ-RNSP2序列TA克隆 | 第40-41页 |
| 3.3 GZ-RNSP2序列测定结果 | 第41-42页 |
| 3.4 GZ-RNSP2序列BLAST分析 | 第42-45页 |
| 3.5 GZ-RNsp2核苷酸同源性分析 | 第45页 |
| 3.6 GZ-RNsp2氨基酸同源性分析 | 第45-46页 |
| 3.7 GZ-RNsp2基因遗传进化树分析 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 截短NSP2真核表达载体的构建与表达分析 | 第49-59页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| 1.1 载体、细胞 | 第49页 |
| 1.2 主要试剂 | 第49-50页 |
| 1.3 主要仪器 | 第50页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-54页 |
| 2.1 载体构建 | 第50-53页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第50-51页 |
| 2.1.2 PCR扩增 | 第51页 |
| 2.1.3 目的基因纯化、酶切、连接、转化 | 第51-53页 |
| 2.1.3.1 目的基因纯化 | 第51-52页 |
| 2.1.3.2 酶切 | 第52页 |
| 2.1.3.3 连接 | 第52-53页 |
| 2.1.3.4 转化 | 第53页 |
| 2.1.3.5 克隆质粒的鉴定 | 第53页 |
| 2.2 转染 | 第53页 |
| 2.3 间接免疫荧光 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-58页 |
| 3.1 PCR扩增结果 | 第54-55页 |
| 3.2 测序结果 | 第55页 |
| 3.3 酶切鉴定结果 | 第55-56页 |
| 3.4 间接免疫荧光试验结果 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 截短NSP2在PRRSV复制中的作用研究 | 第59-66页 |
| 1 材料 | 第59-60页 |
| 1.1 主要材料 | 第59页 |
| 1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 1.3 主要仪器 | 第59-60页 |
| 2 方法 | 第60-63页 |
| 2.1 Marc145细胞的培养 | 第60-61页 |
| 2.1.1 冻存细胞的复苏与培养 | 第60页 |
| 2.1.2 细胞的冻存 | 第60-61页 |
| 2.2 PRRSV增殖 | 第61页 |
| 2.3 无内毒素质粒提取 | 第61页 |
| 2.4 细胞转染 | 第61-62页 |
| 2.5 接种PRRSV | 第62-63页 |
| 2.6 病毒TCID50的测定 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-65页 |
| 3.1 细胞CPE | 第63-64页 |
| 3.2 TCID50的测定结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 全文结论 | 第66-67页 |
| 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附录一 攻读硕士研究生期间发表的文章 | 第76-77页 |
| 附录二 各种培养基、溶液及试剂的配制 | 第77-79页 |