| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 文献综述1 | 第14-23页 |
| 文献综述2 | 第23-33页 |
| 试验研究 | 第33-73页 |
| 第一章 羊口疮病毒大足株(OrfV-DZ株)分离与鉴定 | 第33-47页 |
| 1.材料 | 第33-34页 |
| 1.1 主要材料 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 1.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 2.方法 | 第34-39页 |
| 2.1 临床症状观察 | 第34页 |
| 2.2 临床样品采集 | 第34页 |
| 2.3 引物设计 | 第34页 |
| 2.4 病料DNA提取 | 第34-35页 |
| 2.5 病料PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.6 羔羊睾丸细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.7 羔羊睾丸细胞培养 | 第37页 |
| 2.8 羊口疮病毒的分离 | 第37页 |
| 2.9 细胞培养物F5代TCID50值测定 | 第37-38页 |
| 2.10 间接免疫荧光方法检测细胞培养物 | 第38页 |
| 2.11 PCR方法扩增细胞培养物 | 第38页 |
| 2.12 细胞培养物PCR扩增产物测序及遗传进化分析 | 第38-39页 |
| 2.13 细胞培养物F5代动物感染试验 | 第39页 |
| 3.结果 | 第39-45页 |
| 3.1 临床症状观察结果 | 第39-40页 |
| 3.2 临床样本PCR检测结果 | 第40页 |
| 3.3 细胞病变观察结果 | 第40-41页 |
| 3.4 细胞培养物第5代TCID50值测定结果 | 第41-42页 |
| 3.5 间接免疫荧光检测结果 | 第42页 |
| 3.6 不同代次细胞培养物PCR检测结果 | 第42-43页 |
| 3.7 细胞培养物PCR扩增产物序列测定结果 | 第43页 |
| 3.8 细胞培养物PCR扩增产物核苷酸及编码蛋白同源性分析 | 第43-44页 |
| 3.9 细胞培养物PCR扩增产物遗传进化分析 | 第44页 |
| 3.10 动物感染试验结果 | 第44-45页 |
| 4.讨论 | 第45-46页 |
| 5.小结 | 第46-47页 |
| 第二章 基于PMA-PCR技术检测活OrfV方法的建立 | 第47-56页 |
| 1.材料 | 第47-48页 |
| 1.1 主要材料 | 第47页 |
| 1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 1.3 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2.方法 | 第48-49页 |
| 2.1 引物设计及PCR扩增 | 第48页 |
| 2.2 最佳灭活温度的选择 | 第48页 |
| 2.3 最佳光照时间的选择 | 第48页 |
| 2.4 完全抑制灭活OrfV扩增的最小PMA浓度确定 | 第48-49页 |
| 2.5 不抑制活OrfV扩增的最大PMA浓度确定 | 第49页 |
| 2.6 PMA对不同比例活/死OrfV样品检测效果 | 第49页 |
| 2.7 PMA-PCR方法特异性检测 | 第49页 |
| 3.结果 | 第49-53页 |
| 3.1 活OrfV灭活时间结果 | 第49-50页 |
| 3.2 最佳曝光时间结果 | 第50页 |
| 3.3 完全抑制灭活OrfV扩增的最小PMA浓度 | 第50-51页 |
| 3.4 不抑制活OrfV扩增的最大PMA浓度 | 第51-52页 |
| 3.5 PMA对不同比例活/死OrfV的样品检测结果 | 第52页 |
| 3.6 特异性检测结果 | 第52-53页 |
| 4.讨论 | 第53-55页 |
| 5.小结 | 第55-56页 |
| 第三章 OrfV-DZ株在不同细胞上的增殖特性研究 | 第56-73页 |
| 1.材料 | 第56-57页 |
| 1.1 病毒株及细胞系 | 第56页 |
| 1.2 主要试剂 | 第56页 |
| 1.3 主要仪器 | 第56-57页 |
| 2.方法 | 第57-60页 |
| 2.1 犊牛睾丸和鸡胚成纤维原代细胞的制备与培养 | 第57-58页 |
| 2.2 传代细胞系的培养 | 第58-59页 |
| 2.3 OrfV-DZ株接种不同细胞及增殖 | 第59页 |
| 2.4 OrfV-DZ株在不同细胞上的病变观察 | 第59页 |
| 2.5 OrfV-DZ株在BT、MDBK、Hela细胞第5代TCID50测定 | 第59页 |
| 2.6 间接免疫荧光方法检测OrfV-DZ株在BT、MDBK、Hela细胞中增殖 | 第59页 |
| 2.7 PMA-PCR方法检测OrfV-DZ株在BT、MDBK、Hela细胞的增殖 | 第59页 |
| 2.8 qPCR方法检测OrfV-DZ株在BT、MDBK、Hela细胞的增殖 | 第59-60页 |
| 3.结果 | 第60-70页 |
| 3.1 OrfV-DZ株在不同细胞上的病变观察结果 | 第60-64页 |
| 3.2 OrfV-DZ株在BT、MDBK、Hela细胞F5代TCID50测定结果 | 第64-66页 |
| 3.3 OrfV-DZ株在BT、MDBK、Hela细胞F5代间接免疫荧光检测结果 | 第66-67页 |
| 3.4 PMA-PCR检测OrfV-DZ株在BT、MDBK、Hela细胞的增殖结果 | 第67-68页 |
| 3.5 qPCR检测OrfV-DZ株在不同细胞的增殖结果 | 第68-70页 |
| 4.讨论 | 第70-71页 |
| 5.小结 | 第71-73页 |
| 全文结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-91页 |
| 附录一 攻读硕士期间发表论文情况 | 第91-93页 |
| 附录二 主要培养基、溶液及试剂配制 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
