| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第10-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-25页 |
| 1.1 乳腺癌 | 第16-17页 |
| 1.2 乳腺癌亚型分类及多药耐药机理 | 第17-18页 |
| 1.3 Kif11 基因研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 Kif11 基因与ECM重塑过程的相关性 | 第19-21页 |
| 1.5 上皮间质转化过程与癌症进展 | 第21-23页 |
| 1.6 肿瘤微环境及3D培养体系 | 第23-25页 |
| 第二章 基于生物信息学评估Kif11 基因表达水平与乳腺癌进展的相关性 | 第25-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 乳腺癌组织芯片GEO数据处理及差异表达基因分析 | 第26页 |
| 2.2.2 乳腺癌进展差异表达基因富集分析及信号通路分析 | 第26-27页 |
| 2.2.3 乳腺癌进展相关蛋白质相互作用网络分析 | 第27页 |
| 2.2.4 乳腺癌进展核心基因表达水平与Kif11 基因表达水平的相关性分析 | 第27页 |
| 2.2.5 GENT数据库中Kif11 基因表达水平与癌症进展相关性分析 | 第27-28页 |
| 2.2.6 UALCAN数据库中Kif11 基因与乳腺癌病理特性相关性预测分析 | 第28页 |
| 2.2.7 数据分析 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-44页 |
| 2.3.1 乳腺癌组织芯片GEO数据库分析结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 乳腺癌进展相关差异表达基因富集分析结果 | 第30-34页 |
| 2.3.3 乳腺癌进展相关KEGG信号通路分析结果 | 第34-36页 |
| 2.3.4 乳腺癌进展的核心基因分析结果 | 第36-37页 |
| 2.3.5 乳腺癌进展核心基因表达水平与Kif11 基因表达水平相关性分析结果 | 第37-39页 |
| 2.3.6 在不同癌症组织中的Kif11 基因表达水平分析结果 | 第39-42页 |
| 2.3.7 Kif11 基因表达水平与乳腺癌临床病理特性的相关性分析结果 | 第42-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 Kif11 基因表达水平与乳腺癌进展的相关性分析 | 第46-91页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-50页 |
| 3.1.1 临床患者基本信息及样本收集 | 第47-48页 |
| 3.1.2 乳腺癌细胞系 | 第48页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第48-50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-67页 |
| 3.2.1 乳腺癌组织及其对应癌旁组织石蜡切片的制备 | 第50页 |
| 3.2.2 组织切片的HE染色 | 第50-51页 |
| 3.2.3 石蜡组织切片的Kif11 蛋白免疫组织化学染色检测 | 第51-52页 |
| 3.2.4 新鲜临床组织样本的荧光定量PCR分析 | 第52-55页 |
| 3.2.4.1 新鲜临床病理组织样本的RNA提取 | 第52-53页 |
| 3.2.4.2 合成cDNA | 第53-54页 |
| 3.2.4.3 real-time RT-PCR | 第54-55页 |
| 3.2.5 新鲜临床组织样本的Western Blot检测 | 第55-58页 |
| 3.2.5.1 新鲜临床样本组织总蛋白的提取 | 第55页 |
| 3.2.5.2 新鲜临床样本组织总蛋白浓度的测定 | 第55-56页 |
| 3.2.5.3 十二烷基磺酸钠-丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳 | 第56-57页 |
| 3.2.5.4 蛋白膜转印及抗体识别 | 第57-58页 |
| 3.2.6 乳腺癌细胞系培养 | 第58-59页 |
| 3.2.7 siRNA干扰乳腺癌细胞Kif11 基因表达 | 第59-60页 |
| 3.2.8 siRNA转染乳腺癌细胞后Kif11 基因荧光定量PCR检测 | 第60-61页 |
| 3.2.8.1 细胞RNA的提取 | 第60-61页 |
| 3.2.8.2 合成cDNA | 第61页 |
| 3.2.8.3 real-time RT-PCR | 第61页 |
| 3.2.9 siRNA转染乳腺癌细胞后Kif11 蛋白Western blot检测 | 第61-62页 |
| 3.2.9.1 细胞总蛋白的提取 | 第61-62页 |
| 3.2.9.2 细胞总蛋白浓度的测定 | 第62页 |
| 3.2.9.3 细胞总蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳 | 第62页 |
| 3.2.9.4 蛋白膜转印及抗体识别 | 第62页 |
| 3.2.10 siRNA转染乳腺癌细胞后细胞增殖能力检测 | 第62-63页 |
| 3.2.11 siRNA转染后细胞侵袭检测 | 第63页 |
| 3.2.12 siRNA转染乳腺癌细胞后ECM重塑过程调控基因表达水平检测 | 第63-64页 |
| 3.2.13 siRNA转染乳腺癌细胞后EMT转录因子表达水平检测 | 第64页 |
| 3.2.14 siRNA转染乳腺癌细胞后乳腺癌进展核心基因表达水平检测 | 第64-65页 |
| 3.2.15 siRNA转染后细胞化疗药物处理及细胞凋亡、浸润蛋白表达检测 | 第65-66页 |
| 3.2.16 数据统计 | 第66-67页 |
| 3.3 实验结果 | 第67-88页 |
| 3.3.1 乳腺癌组织及其对应癌旁组织的Kif11 蛋白免疫组织化学染色结果 | 第67-68页 |
| 3.3.2 新鲜乳腺癌组织及其对应癌旁组织的Kif11 基因表达水平的检测结果 | 第68-69页 |
| 3.3.3 新鲜乳腺癌组织及其对应癌旁组织的Kif11 蛋白表达水平的检测结果 | 第69-70页 |
| 3.3.4 乳腺癌组织Kif11 蛋白表达水平与临床病理参数的相关性的分析结果 | 第70-72页 |
| 3.3.5 乳腺癌组织Kif11 蛋白表达水平与乳腺癌患者预后的相关性结果分析 | 第72-74页 |
| 3.3.6 转染siRNA后乳腺癌细胞系的Kif11 基因表达水平的检测结果 | 第74-75页 |
| 3.3.7 转染siRNA后乳腺癌细胞系的Kif11 蛋白表达水平的检测结果 | 第75-76页 |
| 3.3.8 下调Kif11 基因表达水平对乳腺癌细胞系增殖能力的影响 | 第76-77页 |
| 3.3.9 下调Kif11 基因表达水平对乳腺癌细胞系侵袭能力的影响 | 第77-78页 |
| 3.3.10 下调Kif11 基因表达水平对乳腺癌细胞系ECM重塑过程的影响 | 第78-80页 |
| 3.3.11 下调Kif11 基因表达水平对乳腺癌细胞系EMT转录因子表达水平的影响 | 第80-82页 |
| 3.3.12 下调Kif11 基因表达水平对乳腺癌进展核心基因表达水平的影响 | 第82-85页 |
| 3.3.13 下调Kif11 基因表达水平与乳腺癌细胞系对5-Fu化疗药物抗性的相关性分析 | 第85-88页 |
| 3.4 讨论 | 第88-91页 |
| 第四章 3D培养体系下Kif11 基因表达水平与乳腺癌进展的相关性分析 | 第91-147页 |
| 4.1 实验材料 | 第92-94页 |
| 4.1.1 临床样本及收集 | 第92页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第92页 |
| 4.1.3 主要实验溶液及其配制 | 第92-94页 |
| 4.2 实验方法 | 第94-107页 |
| 4.2.1 乳腺癌组织和癌旁组织ECM的制备 | 第94页 |
| 4.2.2 乳腺癌组织和癌旁组织ECM的特异性染色 | 第94-97页 |
| 4.2.2.1 ECM石蜡切片的制备 | 第94-95页 |
| 4.2.2.2 ECM切片的HE染色 | 第95页 |
| 4.2.2.3 ECM切片的DAPI染色 | 第95页 |
| 4.2.2.4 ECM切片的Van Gieson染色 | 第95-96页 |
| 4.2.2.5 ECM切片的地衣红染色 | 第96页 |
| 4.2.2.6 ECM切片的阿尔新蓝/核固红染色 | 第96-97页 |
| 4.2.3 乳腺癌组织和癌旁组织ECM的生化成分检测 | 第97-101页 |
| 4.2.3.1 ECM的 DNA含量测定 | 第97-98页 |
| 4.2.3.2 ECM的 DNA片段长度测定 | 第98页 |
| 4.2.3.3 ECM的胶原蛋白含量测定 | 第98-99页 |
| 4.2.3.4 ECM的弹性蛋白含量测定 | 第99-100页 |
| 4.2.3.5 ECM的糖胺聚糖含量测定 | 第100-101页 |
| 4.2.4 乳腺癌细胞系的培养 | 第101页 |
| 4.2.5 3D培养体系的构建 | 第101页 |
| 4.2.6 3D培养体系的组织学分析 | 第101-102页 |
| 4.2.6.1 3D培养体系石蜡切片的制备 | 第101-102页 |
| 4.2.6.2 3D培养体系石蜡切片的HE染色 | 第102页 |
| 4.2.6.3 3D培养体系石蜡组织切片的免疫组织化学染色检测 | 第102页 |
| 4.2.7 3D培养体系中的Kif11 基因的荧光定量PCR检测 | 第102页 |
| 4.2.8 3D培养体系中Kif11 蛋白的Western Blot检测 | 第102-103页 |
| 4.2.9 3D培养体系中ECM重塑相关基因表达水平的检测 | 第103页 |
| 4.2.10 3D培养体系中EMT转录因子表达水平的检测 | 第103页 |
| 4.2.11 3D培养体系中乳腺癌进展核心基因表达水平的检测 | 第103页 |
| 4.2.12 3D培养体系对化疗药物抗性的检测 | 第103-104页 |
| 4.2.13 利用SB731452 下调3D培养体系中的Kif11 基因表达水平 | 第104页 |
| 4.2.14 3D培养体系中下调Kif11 基因表达水平后细胞增殖能力的检测 | 第104-105页 |
| 4.2.15 3D培养体系中下调Kif11 基因表达水平后ECM重塑调控基因表达水平的检测 | 第105页 |
| 4.2.16 3D培养体系中下调Kif11 基因表达水平后EMT转录因子表达水平的检测 | 第105页 |
| 4.2.17 3D培养体系中下调Kif11 基因表达水平后乳腺癌进展核心基因表达水平的检测 | 第105-106页 |
| 4.2.18 数据分析 | 第106-107页 |
| 4.3 实验结果 | 第107-144页 |
| 4.3.1 乳腺癌组织和癌旁组织ECM特异性染色结果 | 第107-112页 |
| 4.3.1.1 ECM切片的HE染色结果 | 第107-108页 |
| 4.3.1.2 ECM切片的DAPI染色结果 | 第108-109页 |
| 4.3.1.3 ECM切片的Van Gieson染色结果 | 第109-110页 |
| 4.3.1.4 ECM切片的地衣红染色结果 | 第110-111页 |
| 4.3.1.5 ECM切片的阿尔新蓝/核固红染色结果 | 第111-112页 |
| 4.3.2 乳腺癌组织和癌旁组织ECM的生化成分检测结果 | 第112-117页 |
| 4.3.2.1 ECM的 DNA残留率检测结果 | 第112-113页 |
| 4.3.2.2 ECM的 DNA片段长度检测结果 | 第113-114页 |
| 4.3.2.2 ECM的胶原蛋白含量检测结果 | 第114-115页 |
| 4.3.2.3 ECM的弹性蛋白含量检测结果 | 第115-116页 |
| 4.3.2.4 ECM的糖胺聚糖含量检测结果 | 第116-117页 |
| 4.3.3 3D培养体系的组织学染色结果 | 第117-120页 |
| 4.3.4 3D培养体系的免疫组织化学染色结果 | 第120-122页 |
| 4.3.5 3D培养体系中Kif11 基因荧光定量PCR检测结果 | 第122-123页 |
| 4.3.6 3D培养体系中Kif11 蛋白表达水平结果 | 第123-125页 |
| 4.3.7 3D培养体系中的ECM重塑过程调控基因表达水平结果 | 第125-127页 |
| 4.3.8 3D培养体系中的EMT转录因子表达水平结果 | 第127-129页 |
| 4.3.9 3D培养体系中的乳腺癌进展核心基因表达水平结果 | 第129-131页 |
| 4.3.10 5 -Fu处理3D培养体系后多药耐药基因荧光定量PCR检测结果 | 第131-133页 |
| 4.3.11 利用Kif11 抑制剂下调3D培养体系中的Kif11 基因表达水平 | 第133-135页 |
| 4.3.12 下调3D体系中Kif11 基因表达水平对乳腺癌细胞增殖能力的影响 | 第135-136页 |
| 4.3.13 下调3D体系中Kif11 基因表达水平对ECM重塑过程的影响 | 第136-138页 |
| 4.3.14 下调3D体系中Kif11 基因表达水平对EMT转录因子表达水平的影响 | 第138-140页 |
| 4.3.15 下调3D体系中Kif11 基因表达水平对乳腺癌进展核心基因表达水平的影响 | 第140-144页 |
| 4.4 讨论 | 第144-147页 |
| 第五章 结论 | 第147-148页 |
| 参考文献 | 第148-161页 |
| 致谢 | 第161-162页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及成果 | 第162页 |
