| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 利巴韦林概述 | 第10-16页 |
| 1.1.1 利巴韦林基本性质 | 第10页 |
| 1.1.2 利巴韦林的作用机制 | 第10-11页 |
| 1.1.3 利巴韦林的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.4 合成利巴韦林的方法研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2 嘌呤核苷磷酸化酶概述 | 第16-19页 |
| 1.2.1 嘌呤核苷磷酸化酶的定义与作用 | 第16-17页 |
| 1.2.2 嘌呤核苷磷酸化酶的来源和分类 | 第17-18页 |
| 1.2.3 嘌呤核苷磷酸化酶的研究现状 | 第18-19页 |
| 1.3 课题的立题背景及主要内容 | 第19-21页 |
| 1.3.1 立题背景 | 第19页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第2章 材料和方法 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验菌种及质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 培养基配方 | 第21页 |
| 2.1.3 实验材料与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.5 实验溶液配置 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-31页 |
| 2.2.1 培养方法 | 第24-25页 |
| 2.2.2 浓度测定 | 第25页 |
| 2.2.3 目的基因合成 | 第25页 |
| 2.2.4 表达载体的构建与鉴定 | 第25页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态制备及转化 | 第25-26页 |
| 2.2.6 目的蛋白的诱导表达及条件优化 | 第26页 |
| 2.2.7 目的蛋白的分离与纯化 | 第26页 |
| 2.2.8 蛋白质浓度测定 | 第26-27页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE | 第27-28页 |
| 2.2.10 质粒稳定性 | 第28页 |
| 2.2.11 酶法合成利巴韦林的测定方法 | 第28-29页 |
| 2.2.12 酶活测定 | 第29-31页 |
| 第3章 乙酰短杆菌培养条件的优化 | 第31-42页 |
| 3.1 前言 | 第31页 |
| 3.2 乙酰短杆菌预培养 | 第31-35页 |
| 3.2.1 种子生长曲线 | 第31-32页 |
| 3.2.2 乙酰短杆菌酶法合成利巴韦林 | 第32-33页 |
| 3.2.3 多种培养基方案对比 | 第33-34页 |
| 3.2.4 不同蛋白胨对比 | 第34-35页 |
| 3.3 Plackett-Burman (PB)法优化培养基 | 第35-37页 |
| 3.4 响应面法优化培养基 | 第37-41页 |
| 3.4.1 Box-Behnken (BBD)结果 | 第37-40页 |
| 3.4.2 摇瓶验证结果 | 第40-41页 |
| 3.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 重组菌的构建表达及蛋白纯化 | 第42-52页 |
| 4.1 前言 | 第42页 |
| 4.2 实验结果讨论 | 第42-50页 |
| 4.2.1 表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 4.2.2 目的蛋白的诱导表达及条件优化 | 第45-47页 |
| 4.2.3 目的蛋白的分离与纯化 | 第47-50页 |
| 4.2.4 质粒稳定性结果分析 | 第50页 |
| 4.3 本章小结 | 第50-52页 |
| 第5章 酶学性质研究 | 第52-61页 |
| 5.1 前言 | 第52页 |
| 5.2 实验结果与讨论 | 第52-59页 |
| 5.2.1 酶活测定 | 第52-53页 |
| 5.2.2 最适反应温度及最适反应pH | 第53-55页 |
| 5.2.3 温度稳定性及pH稳定性 | 第55-58页 |
| 5.2.4 动力学参数 | 第58-59页 |
| 5.3 本章小结 | 第59-61页 |
| 第6章 酶法合成利巴韦林工艺优化 | 第61-68页 |
| 6.1 前言 | 第61页 |
| 6.2 实验结果与分析 | 第61-67页 |
| 6.2.1 酶反应过程曲线 | 第61-63页 |
| 6.2.2 诱导及非诱导蛋白酶反应对比 | 第63页 |
| 6.2.3 菌体添加量优化 | 第63-65页 |
| 6.2.4 底物浓度优化 | 第65-67页 |
| 6.3 本章小结 | 第67-68页 |
| 第7章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 7.1 结论 | 第68-69页 |
| 7.2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 发表专利 | 第78页 |