| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 绪论 | 第14-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-41页 |
| 第一章 兔出血症病毒研究进展 | 第15-31页 |
| 1 RHDV基因组的结构与功能 | 第15-16页 |
| 2 RHDV衣壳蛋白VP60的结构 | 第16-17页 |
| 3 RHDV的遗传进化 | 第17-18页 |
| 4 RHDV HBGAs受体 | 第18页 |
| 5 HBGAs结合位点 | 第18-20页 |
| 6 抵抗RHDV作用机制的形成 | 第20页 |
| 7 RHDV的预防与控制 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-31页 |
| 第二章 噬菌体展示技术的研究进展 | 第31-41页 |
| 1 丝状噬菌体 | 第31-34页 |
| 1.1 M13噬菌体 | 第31-32页 |
| 1.2 M13噬菌体融合蛋白的选择 | 第32-33页 |
| 1.3 M13噬菌体展示系统 | 第33-34页 |
| 2 T4噬菌体展示系统 | 第34页 |
| 3 T7噬菌体展示系统 | 第34页 |
| 4 λ噬菌体展示系统 | 第34-35页 |
| 5 噬菌体展示技术的应用 | 第35-36页 |
| 5.1 疫苗开发 | 第35页 |
| 5.2 蛋白互作 | 第35页 |
| 5.3 底物和抑制剂的选择 | 第35-36页 |
| 5.4 表位鉴定 | 第36页 |
| 6 噬菌体载体的选择 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-41页 |
| 第二篇 实验部分 | 第41-95页 |
| 第一章 免疫血清对VP60 VLPs与受体HBGAs结合的阻断效应研究 | 第41-57页 |
| 1 试验材料与方法 | 第42-46页 |
| 1.1 试验材料 | 第42页 |
| 1.2 VP60蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第42-44页 |
| 1.3 分析VP60 VLPs与受体HBGAs的结合 | 第44-45页 |
| 1.4 免疫血清对VP60 VLPs与受体HBGAs结合的阻断效应 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-51页 |
| 2.1 SDS-PAGE和Western-blot鉴定VP60蛋白 | 第46-47页 |
| 2.2 透射电镜观察VP60 VLPs | 第47-48页 |
| 2.3 VP60蛋白的血凝试验 | 第48页 |
| 2.4 VP60 VLPs与受体HBGAs的结合 | 第48-49页 |
| 2.5 免疫血清对VP60 VLPs与受体HBGAs结合的阻断效应 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 第二章 兔出血症病毒VP60蛋白特异性噬菌体肽库的构建与鉴定 | 第57-81页 |
| 1 试验材料与方法 | 第58-68页 |
| 1.1 试验材料 | 第58页 |
| 1.2 VP60基因的扩增与鉴定 | 第58-59页 |
| 1.3 VP60基因随机消化片段的制备 | 第59-63页 |
| 1.4 噬菌粒载体的制备 | 第63-64页 |
| 1.5 VP60酶切片段与噬菌粒载体pC89的连接 | 第64页 |
| 1.6 高效感受态宿主菌的制备 | 第64-65页 |
| 1.7 辅助噬菌体VCSM13的制备 | 第65-66页 |
| 1.8 VP60基因特异性噬菌体展示肽库的构建 | 第66页 |
| 1.9 VP60基因特异性噬菌体展示肽库滴度的测定 | 第66页 |
| 1.10 VP60基因特异性噬菌体展示肽库随机性的鉴定 | 第66-67页 |
| 1.11 生物淘选 | 第67-68页 |
| 1.12 噬菌体原位杂交 | 第68页 |
| 1.13 重组噬菌体的PCR扩增及测序 | 第68页 |
| 2 结果 | 第68-75页 |
| 2.1 VP60基因PCR扩增与测序 | 第68页 |
| 2.2 DNase Ⅰ消化条件的优化 | 第68-69页 |
| 2.3 VP60基因随机片段制备 | 第69-70页 |
| 2.4 噬菌体载体的制备 | 第70页 |
| 2.5 高效感受态宿主菌敏感性的鉴定 | 第70-71页 |
| 2.6 辅助噬菌体VCSM13滴度的测定 | 第71页 |
| 2.7 肽库滴度的测定 | 第71-72页 |
| 2.8 肽库随机性的鉴定及测序 | 第72-73页 |
| 2.9 四轮筛选产率 | 第73-74页 |
| 2.10 噬菌体原位杂交结果 | 第74-75页 |
| 2.11 VP60特异性噬菌体展示肽库的筛选及序列测定 | 第75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 第三章 RHDV VP60与受体HBGAs结合域的筛选与鉴定 | 第81-95页 |
| 1 试验材料与方法 | 第81-85页 |
| 1.1 试验材料 | 第81-82页 |
| 1.2 生物淘选 | 第82页 |
| 1.3 抗VP60鼠及兔多克隆抗体的制备及纯化 | 第82-83页 |
| 1.4 噬菌体原位杂交 | 第83页 |
| 1.5 重组噬菌体的PCR扩增及测序 | 第83-84页 |
| 1.6 HBGAs结合域的表达及纯化 | 第84-85页 |
| 1.7 HBGAs结合域的鉴定 | 第85页 |
| 2 结果 | 第85-89页 |
| 2.1 HBGAs结合域的筛选产率 | 第85页 |
| 2.2 抗VP60鼠及兔多克隆抗体效价测定 | 第85-86页 |
| 2.3 噬菌体原位杂交 | 第86页 |
| 2.4 VP60与HBGAs的结合域序列测定 | 第86-87页 |
| 2.5 HBGAs结合域的表达 | 第87-88页 |
| 2.6 HBGAs结合域鉴定 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-95页 |
| 结论与展望 | 第95-97页 |
| 全文总结 | 第97-99页 |
| 附录 常用试剂的配制 | 第99-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 个人简历 | 第109-111页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第111页 |
