| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第1章 前言 | 第15-23页 |
| 1.1 乳腺流行病学研究与发病机制 | 第15-16页 |
| 1.2 组织芯片技术 | 第16页 |
| 1.3 DNA甲基化 | 第16-19页 |
| 1.3.1 DNA甲基化简介 | 第16-17页 |
| 1.3.2 DNA甲基化与癌症 | 第17-18页 |
| 1.3.3 DNA甲基化与乳腺癌 | 第18-19页 |
| 1.4 ST5基因简介 | 第19-20页 |
| 1.5 MAPK信号通路 | 第20-23页 |
| 1.5.1 ERK1/2基因简介 | 第20页 |
| 1.5.2 P38基因简介 | 第20-21页 |
| 1.5.3 JNK1基因简介 | 第21页 |
| 1.5.4 MAPK信号通路功能 | 第21-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-61页 |
| 2.1 材料 | 第23-30页 |
| 2.1.1 细胞系、组织、质粒、感受态细菌 | 第23页 |
| 2.1.2 实验常用试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.3 所用主要耗材与仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.4 实验所用抗体 | 第26-27页 |
| 2.1.5 试剂制备方法 | 第27-30页 |
| 2.1.5.1 分子克隆的主要试剂制备方法 | 第27-28页 |
| 2.1.5.2 Western blot主要试剂制备方法 | 第28-29页 |
| 2.1.5.3 细胞培养所用主要试剂制备方法 | 第29页 |
| 2.1.5.4 免疫组化所用试剂配制方法 | 第29-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-61页 |
| 2.2.1 ST5过表达载体质粒的构建 | 第30-40页 |
| 2.2.1.1 ST5的引物合成 | 第30页 |
| 2.2.1.2 Trizol法提取细胞总RNA | 第30-31页 |
| 2.2.1.3 cDNA的制备 | 第31页 |
| 2.2.1.4 PCR扩增ST5片段 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.1.6 PCR产物胶回收 | 第33-34页 |
| 2.2.1.7 DNA质粒小提回收 | 第34页 |
| 2.2.1.8 DNA质粒中提回收 | 第34-36页 |
| 2.2.1.9 DNA纯化回收 | 第36页 |
| 2.2.1.10 感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.2.1.11 DNA限制性内切酶消化 | 第36-37页 |
| 2.2.1.12 DNA的连接 | 第37-38页 |
| 2.2.1.13 DNA的转化 | 第38页 |
| 2.2.1.14 ST5-pcDNA3.1(+)质粒的构建过程 | 第38-40页 |
| 2.2.2 乳腺癌细胞的培养方法 | 第40-42页 |
| 2.2.2.1 乳腺癌细胞的复苏 | 第40页 |
| 2.2.2.2 乳腺癌细胞的培养 | 第40-41页 |
| 2.2.2.3 乳腺癌细胞的传代 | 第41页 |
| 2.2.2.4 乳腺癌细胞的冻存 | 第41-42页 |
| 2.2.3 乳腺癌细胞株的RT-PCR实验方法 | 第42-43页 |
| 2.2.4 乳腺癌细胞株的瞬时转染 | 第43-44页 |
| 2.2.5 siRNA稀释 | 第44页 |
| 2.2.6 乳腺癌细胞株siRNA转染 | 第44页 |
| 2.2.7 稳转细胞系的筛选 | 第44-45页 |
| 2.2.8 WESTEN-BLOT实验方法 | 第45-49页 |
| 2.2.8.1 胞/组织蛋白质样品的准备 | 第45-47页 |
| 2.2.8.2 分离胶和浓缩胶的配制方法 | 第47-48页 |
| 2.2.8.3 SDS-PAGE电泳跑胶 | 第48-49页 |
| 2.2.8.4 SWESTEN-BLOT转膜及孵育抗体 | 第49页 |
| 2.2.9 免疫组化实验方法 | 第49-51页 |
| 2.2.10 MTT实验方法 | 第51-53页 |
| 2.2.11 PI检测细胞周期实验方法 | 第53页 |
| 2.2.12 细胞凋亡检测 | 第53-54页 |
| 2.2.13 细胞划痕实验 | 第54-55页 |
| 2.2.14 Transwell迁移实验 | 第55-56页 |
| 2.2.15 MSP法检测乳腺癌细胞的ST5基因甲基化改变 | 第56-61页 |
| 2.2.15.1 MSP引物设计 | 第56-57页 |
| 2.2.15.2 细胞中总DNA的抽提 | 第57-58页 |
| 2.2.15.3 DNA纯化与亚硫酸盐修饰 | 第58-59页 |
| 2.2.15.4 聚合酶链反应 | 第59-61页 |
| 第3章 实验结果 | 第61-74页 |
| 3.1 不同恶性程度的乳腺癌细胞中ST5表达情况 | 第61-62页 |
| 3.2 乳腺癌组织样本中ST5的表达情况 | 第62页 |
| 3.3 乳腺癌病理组织学与ST5表达的关联性分析 | 第62-63页 |
| 3.4 ST5过表达载体构建 | 第63-65页 |
| 3.5 筛选稳定转染的ST5-pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(+)空载的细胞系 | 第65页 |
| 3.6 转染siRNA干扰ST5的表达 | 第65-66页 |
| 3.7 上调或下调ST5对乳腺癌细胞系表型的影响 | 第66-70页 |
| 3.7.1 上调或下调ST5对乳腺癌细胞系增殖的影响 | 第66页 |
| 3.7.2 上调或下调ST5对乳腺癌细胞系迁移的影响 | 第66-68页 |
| 3.7.2.1 划痕实验 | 第67页 |
| 3.7.2.2 Transwell迁移实验 | 第67-68页 |
| 3.7.3 上调或下调ST5对乳腺癌细胞系细胞周期的影响 | 第68-69页 |
| 3.7.4 上调或下调ST5对乳腺癌细胞系细胞凋亡的影响 | 第69-70页 |
| 3.8 DNA甲基化对ST5在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中表达调控 | 第70-74页 |
| 3.8.1 去甲基化试剂5-aza 处理MDA-MB-23 1细胞对ST5表达量影响 | 第70页 |
| 3.8.2 去甲基化试剂5-aza 处理MDA-MB-231细胞对细胞表型的影响 | 第70-72页 |
| 3.8.2.1 MTT细胞增殖实验 | 第71页 |
| 3.8.2.2 Transwell迁移实验 | 第71-72页 |
| 3.8.3 ST5基因启动子区5'CpG岛甲基化状态 | 第72-73页 |
| 3.8.4 ST5介导的分子机制 | 第73-74页 |
| 第4章 讨论和展望 | 第74-80页 |
| 4.1 讨论 | 第74-78页 |
| 4.1.1 ST5在乳腺癌样本和细胞系中的表达 | 第74页 |
| 4.1.2 乳腺癌病理分级与ST5表达的关联性分析 | 第74-75页 |
| 4.1.3 敲除或过表达ST5对乳腺癌细胞系MDA-MB-231表型影响 | 第75页 |
| 4.1.4 去甲基化试剂5-aza处理MDA-MB-231细胞对ST5蛋白表达量的影响 | 第75-76页 |
| 4.1.5 去甲基化试剂5-aza处理MDA-MB-231细胞对细胞表型的影响 | 第76页 |
| 4.1.6 ST5基因启动子区5'CpG岛甲基化状态 | 第76页 |
| 4.1.7 ST5介导的分子机制的探讨 | 第76-78页 |
| 4.2 展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 硕士期间所发学术论文 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
