| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-16页 |
| 缩略词表 | 第16-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-31页 |
| 1.1 细菌分泌系统 | 第17-19页 |
| 1.2 肠出血性大肠杆菌O157的流行现状和致病机制 | 第19-20页 |
| 1.2.1 肠出血性大肠杆菌O157的流行现状 | 第19-20页 |
| 1.2.2 肠出血性大肠杆菌O157的致病机制 | 第20页 |
| 1.3 细菌T3SS研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.1 EHEC作为T3SS模式微生物的优势 | 第20页 |
| 1.3.2 EHEC T3SS结构和LEE毒力岛 | 第20-22页 |
| 1.3.3 效应蛋白的作用 | 第22页 |
| 1.4 效应蛋白转运的研究进展 | 第22-28页 |
| 1.4.1 效应蛋白转运和分泌的关系 | 第23-24页 |
| 1.4.2 效应蛋白转运的研究方法 | 第24页 |
| 1.4.3 效应蛋白氨基端分泌信号 | 第24-25页 |
| 1.4.4 效应蛋白的伴侣蛋白结合区 | 第25-27页 |
| 1.4.5 效应蛋白在T3SS跨膜通道上的定位 | 第27页 |
| 1.4.6 开关蛋白SepD/SepL | 第27-28页 |
| 1.5 研究内容 | 第28-29页 |
| 1.5.1 SepD相互作用蛋白的筛选 | 第28-29页 |
| 1.5.2 SepD调控效应蛋白转运的机制研究 | 第29页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 SepD相互作用蛋白的筛选 | 第31-50页 |
| 2.1 引言 | 第31-32页 |
| 2.2 实验材料 | 第32-37页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第32页 |
| 2.2.2 引物 | 第32-33页 |
| 2.2.3 仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.4 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.2.5 溶液配制 | 第35-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-46页 |
| 2.3.0 菌株的培养及保存 | 第37页 |
| 2.3.1 琼脂糖胶制备及跑胶 | 第37-38页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE胶配制及跑胶 | 第38-39页 |
| 2.3.3 细菌基因组DNA提取 | 第39页 |
| 2.3.4 DNA扩增及PCR体系 | 第39-40页 |
| 2.3.5 DNA片段纯化或胶回收 | 第40页 |
| 2.3.6 限制性内切酶酶切及T4 DNA连接酶酶连体系 | 第40-41页 |
| 2.3.7 大肠杆菌感受态制备 | 第41-42页 |
| 2.3.8 质粒提取 | 第42-43页 |
| 2.3.9 质粒转化 | 第43-44页 |
| 2.3.10 菌落PCR | 第44页 |
| 2.3.11 重组蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 2.3.12 western-blot实验 | 第45页 |
| 2.3.13 GST-pull down实验 | 第45-46页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第46-49页 |
| 2.4.1 重组质粒的构建 | 第46-47页 |
| 2.4.2 诱导重组质粒表达蛋白条件的探索 | 第47-48页 |
| 2.4.3 GST pull down检测蛋白相互作用 | 第48-49页 |
| 2.5 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 SepD调控效应蛋白转运的机制研究 | 第50-77页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 实验材料 | 第50-57页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第50-52页 |
| 3.2.2 引物 | 第52-56页 |
| 3.2.3 仪器 | 第56页 |
| 3.2.4 主要试剂 | 第56-57页 |
| 3.2.5 溶液配制 | 第57页 |
| 3.3 实验方法 | 第57-63页 |
| 3.3.1 无缝克隆 | 第57页 |
| 3.3.2 His标签蛋白纯化、透析、浓缩及浓度测定 | 第57-58页 |
| 3.3.3 酶联免疫吸附实验 | 第58-59页 |
| 3.3.4 多克隆抗体的制备 | 第59-60页 |
| 3.3.6 基因敲除 | 第60-61页 |
| 3.3.7 质谱分析 | 第61页 |
| 3.3.8 细菌质膜分离实验 | 第61-62页 |
| 3.3.9 绿色荧光蛋白测定实验 | 第62-63页 |
| 3.3.10 密度分析实验 | 第63页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第63-75页 |
| 3.4.1 GST pull down反向检测CesT与SepD的相互作用 | 第63页 |
| 3.4.2 CesT与SepD各自结合功能域的筛选 | 第63-68页 |
| 3.4.3 分泌表型的研究 | 第68-74页 |
| 3.4.4 SepL的表达调控 | 第74-75页 |
| 3.4.5 OmpA-C多克隆抗体的制备 | 第75页 |
| 3.5 小结 | 第75-77页 |
| 第四章 总结、讨论与展望 | 第77-82页 |
| 4.1 总结 | 第77-78页 |
| 4.2 讨论 | 第78-80页 |
| 4.2.1 SepD不同区域调控效应蛋白和转运蛋白分泌的影响 | 第78-79页 |
| 4.2.2 SepD和CesT的相互作用对效应蛋白分泌的影响 | 第79页 |
| 4.2.3 SepD和CesT的相互作用对SepL调控效应蛋白分泌的影响 | 第79-80页 |
| 4.3 展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-96页 |
| 附录 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第99页 |
