| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 全氟化合物生态毒理效应的研究进展 | 第13-21页 |
| 1.1.1 全氟化合物概况 | 第13-14页 |
| 1.1.2 全氟化合物的污染现状 | 第14-19页 |
| 1.1.2.1 全氟化合物的污染方式 | 第15页 |
| 1.1.2.2 全氟化合物的污染分布 | 第15-19页 |
| 1.1.3 全氟化合物的生态毒理效应 | 第19-21页 |
| 1.1.3.1 PFASs的急/慢性毒性 | 第19页 |
| 1.1.3.2 PFASs的器官及胚胎毒性 | 第19-20页 |
| 1.1.3.3 PFASs的生殖与免疫毒性 | 第20页 |
| 1.1.3.4 PFASs的神经及基因毒性 | 第20-21页 |
| 1.2 全氟化合物生态毒理效应的研究方法 | 第21-29页 |
| 1.2.1 全氟化合物小分子与生物活性大分子相互作用的体外研究方法 | 第21-25页 |
| 1.2.1.1 光谱分析法-紫外分光光度法 | 第21-22页 |
| 1.2.1.2 荧光分光光度法 | 第22页 |
| 1.2.1.3 红外光谱法 | 第22-23页 |
| 1.2.1.4 圆二色光谱法 | 第23-24页 |
| 1.2.1.5 毛细管电泳法 | 第24页 |
| 1.2.1.6 电化学分析法 | 第24-25页 |
| 1.2.1.7 分子对接模拟计算方法 | 第25页 |
| 1.2.2 全氟化合物生物毒性作用的研究方法 | 第25-29页 |
| 1.2.2.1 MTT比色法 | 第26页 |
| 1.2.2.2 蛋白免疫印迹法(WesternBlot) | 第26-27页 |
| 1.2.2.3 原位末端检测技术 | 第27页 |
| 1.2.2.4 实时荧光定量PCR方法 | 第27-28页 |
| 1.2.2.5 凋亡因子检测法 | 第28-29页 |
| 1.2.2.6 其他方法 | 第29页 |
| 1.3 本研究的意义及创新 | 第29-31页 |
| 2 全氟类化合物与生物大分子相互作用的紫外分光光度法研究 | 第31-36页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验材料与条件 | 第31-32页 |
| 2.2.1 化学试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第32页 |
| 2.2.3 实验溶液配制 | 第32页 |
| 2.2.3.1 缓冲溶液的配制 | 第32页 |
| 2.2.3.2 反应溶液的配制 | 第32页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第32页 |
| 2.2.4.1 紫外光谱的测定 | 第32页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第32-35页 |
| 2.3.1 PFASS与蛋白质的相互作用 | 第32-34页 |
| 2.3.2 PFASS与CTDNA的相互作用 | 第34页 |
| 2.3.3 PFASS与HSA/CTDNA的结合常数的测定 | 第34-35页 |
| 2.4 结论 | 第35-36页 |
| 3 全氟类化合物与生物大分子相互作用的荧光分光光度法研究 | 第36-44页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 材料与条件 | 第36-38页 |
| 3.2.1 化学试剂 | 第36页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第36-37页 |
| 3.2.3 实验溶液配制 | 第37页 |
| 3.2.3.1 缓冲溶液的配制 | 第37页 |
| 3.2.3.2 反应溶液的配制 | 第37页 |
| 3.2.4 实验方法 | 第37-38页 |
| 3.2.4.1 荧光猝灭光谱的测定 | 第37页 |
| 3.2.4.2 同步荧光光谱的测定 | 第37页 |
| 3.2.4.3 荧光偏振光谱的测定 | 第37-38页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第38-43页 |
| 3.3.1 荧光光谱实验分析PFOA与HSA相互作用机制 | 第38-43页 |
| 3.3.1.1 荧光猝灭光谱分析 | 第38页 |
| 3.3.1.2 荧光猝灭机理分析 | 第38-39页 |
| 3.3.1.3 PFOA与HSA结合机制分析 | 第39-40页 |
| 3.3.1.4 PFOA与HSA结合作用力类型分析 | 第40-41页 |
| 3.3.1.5 同步荧光光谱实验分析PFOA对HSA构象的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.1.6 偏振荧光光谱实验分析PFOA对HSA色氨酸微区的影响 | 第42-43页 |
| 3.4 结论 | 第43-44页 |
| 4 全氟类化合物与生物大分子相互作用的毛细管电泳法研究 | 第44-61页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 材料与条件 | 第44-46页 |
| 4.2.1 化学试剂 | 第44-45页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第45页 |
| 4.2.3 实验溶液配制 | 第45页 |
| 4.2.3.1 缓冲溶液的配制 | 第45页 |
| 4.2.3.2 工作溶液的配制 | 第45页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第45-46页 |
| 4.2.4.1 PFOA衍生化操作 | 第45页 |
| 4.2.4.2 毛细管电泳运行方法 | 第45-46页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第46-59页 |
| 4.3.1 PFOA衍生化方案 | 第46-47页 |
| 4.3.2 PFOA,PFOS-K,POSF与HSA相互作用的CE分析方法 | 第47-49页 |
| 4.3.3 标准曲线的建立 | 第49-50页 |
| 4.3.4 PFOA,PFOS-K,POSF与HSA相互作用的电泳图 | 第50-54页 |
| 4.3.5 PFOA衍生物与HSA相互作用的结合常数(K)及结合位点数(N) | 第54-59页 |
| 4.3.5.1 应用淌度移动法解析PFASs与相互作用的特征 | 第54-57页 |
| 4.3.5.2 应用PPK法解析PFOA衍生物与HSA相互作用的特征 | 第57-58页 |
| 4.3.5.3 应用简化的Hummel-Dreyer法解析PFOA衍生物与HSA相互作用的特征 | 第58-59页 |
| 4.4 结论 | 第59-61页 |
| 5 分子模拟对接技术研究全氟类化合物与生物大分子的相互作用 | 第61-65页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料与条件 | 第61页 |
| 5.2.1 数据来源 | 第61页 |
| 5.2.2 仪器、操作系统及软件 | 第61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-62页 |
| 5.3.1 RECEPTOR(受体)文件的制备 | 第61页 |
| 5.3.2 LIGAND(配体)文件的制备 | 第61-62页 |
| 5.3.3 格文件的制备 | 第62页 |
| 5.3.4 对接文件的制备 | 第62页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第62-64页 |
| 5.5 结论 | 第64-65页 |
| 6 全氟类化合物对细胞毒性作用的探究 | 第65-75页 |
| 6.1 引言 | 第65页 |
| 6.2 实验材料与条件 | 第65-70页 |
| 6.2.1 实验样本及试剂 | 第65-66页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第66页 |
| 6.2.3 实验溶液配制 | 第66-67页 |
| 6.2.3.1 细胞培养相关溶液的准备 | 第66-67页 |
| 6.2.3.2 细胞形态学观察相关溶液的准备 | 第67页 |
| 6.2.3.3 MTT相关溶液的准备 | 第67页 |
| 6.2.3.4 流式细胞术相关溶液的准备 | 第67页 |
| 6.2.4 实验方法 | 第67-70页 |
| 6.2.4.1 SMMC-7721细胞培养 | 第67-69页 |
| 6.2.4.2 PFOA/PFOS-k/POSF对SMMC-7721肝癌细胞毒性效应的形态学观察 | 第69页 |
| 6.2.4.3 MTT比色分析法研究PFOA/PFOS-k/POSF的细胞毒性效应 | 第69-70页 |
| 6.2.4.4 流式细胞术研究全氟类化合物代表-PFOA的细胞毒性效应 | 第70页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第70-73页 |
| 6.3.1 PFOA/PFOS-K/POSF对SMMC-7721肝癌细胞毒性效应的形态学观察 | 第70-72页 |
| 6.3.2 MTT比色分析法研究PFOA/PFOS-k/POSF对SMMC-7721肝癌细胞毒性效应 | 第72页 |
| 6.3.3 ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞术研究PFOA的细胞毒性效应 | 第72-73页 |
| 6.4 结论 | 第73-75页 |
| 7 蛋白免疫印迹法探究全氟类化合物蛋白水平生理毒性的表现 | 第75-84页 |
| 7.1 引言 | 第75页 |
| 7.2 实验材料与条件 | 第75-81页 |
| 7.2.1 实验样本及试剂 | 第75-76页 |
| 7.2.2 实验仪器 | 第76-77页 |
| 7.2.3 实验溶液配制 | 第77-78页 |
| 7.2.4 实验方法 | 第78-81页 |
| 7.2.4.1 细胞培养与点板上样 | 第78页 |
| 7.2.4.2 PFOA/POSF处理细胞 | 第78页 |
| 7.2.4.3 细胞总蛋白的提取 | 第78页 |
| 7.2.4.4 细胞总蛋白的定量 | 第78-79页 |
| 7.2.4.5 Western Blot(WB)上样蛋白量的确定及变性处理 | 第79页 |
| 7.2.4.6 WB制胶 | 第79-80页 |
| 7.2.4.7 WB上样与电泳 | 第80页 |
| 7.2.4.8 WB转膜 | 第80-81页 |
| 7.2.4.9 WB PVDF膜的封闭 | 第81页 |
| 7.2.4.10 WB一抗孵育 | 第81页 |
| 7.2.4.11 WB二抗孵育 | 第81页 |
| 7.2.4.12 WB检测蛋白,曝光显影 | 第81页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第81-82页 |
| 7.4 结论 | 第82-84页 |
| 8 实时荧光定量法探究全氟类化合物基因水平生理毒性的表现 | 第84-95页 |
| 8.1 引言 | 第84页 |
| 8.2 实验材料与条件 | 第84-89页 |
| 8.2.1 实验样本及试剂 | 第84-85页 |
| 8.2.2 实验仪器 | 第85-86页 |
| 8.2.3 实验溶液配制 | 第86页 |
| 8.2.3.1 PFOA工作母液的配制 | 第86页 |
| 8.2.3.2 50×TAE缓冲液的配制 | 第86页 |
| 8.2.3.3 1%琼脂糖凝胶的配制 | 第86页 |
| 8.2.4 实验方法 | 第86-89页 |
| 8.2.4.1 细胞培养与点板上样 | 第86页 |
| 8.2.4.2 PFOA处理细胞 | 第86页 |
| 8.2.4.3 细胞总RNA的提取 | 第86-87页 |
| 8.2.4.4 RNA细含量及质量检测 | 第87页 |
| 8.2.4.5 反转录cDNA的合成 | 第87-88页 |
| 8.2.4.6 引物设计及处理 | 第88页 |
| 8.2.4.7 实时荧光定量 RT-q PCR 检测反应 | 第88-89页 |
| 8.2.4.8 实时荧光定量RT-qPCR扩增效率标准曲线的绘制 | 第89页 |
| 8.3 结果与讨论 | 第89-93页 |
| 8.3.1 提取的RNA浓度、纯度及完整性检测 | 第89页 |
| 8.3.2 实时荧光定量RT-qPCR熔解曲线情况 | 第89-91页 |
| 8.3.3 实时荧光定量RT-qPCR扩增效率标准曲线 | 第91-93页 |
| 8.3.4 PFOA作用后SMMC-7721细胞基因表达结果分析 | 第93页 |
| 8.4 结论 | 第93-95页 |
| 9 结论与展望 | 第95-98页 |
| 9.1 结论 | 第95-96页 |
| 9.2 展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-107页 |
| 附录 符号和缩略词说明 | 第107-108页 |
| 个人简介 | 第108-109页 |
| 硕士期间发表/投稿论文 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
