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迟缓爱德华菌sRNA的筛选和鉴定及sRNA_EsR240功能分析

中文摘要第5-7页
Abstract第7-9页
符号、变量、缩略词等本论文专用术语的注释表第13-14页
前言第14-16页
综述第16-22页
第一章 迟缓爱德华菌非编码小RNA的预测第22-47页
    1 材料第22页
        1.1 菌株第22页
        1.2 主要试剂及配方第22页
        1.3 实验仪器第22页
    2 方法第22-33页
        2.1 Illumina Hi SeqTM2000测序第22-23页
        2.2 cDNA文库的构建与Illumina测序仪测序第23页
        2.3 RNA-sequencing和生物信息学分析第23-24页
        2.4 RT-PCR第24-26页
        2.5 Northern Blot第26-29页
        2.6 RACE(Rapid amplification cDNA ends)第29-33页
        2.7 EsR240保守性的分析第33页
        2.8 EsR240靶基因的预测第33页
    3 结果与分析第33-44页
        3.1 转录组测序样品的浓度和纯度检测第33页
        3.2 测序随机性评价第33-34页
        3.3 基因覆盖度统计第34页
        3.4 sRNA筛选结果第34-37页
        3.5 RT-PCR验证13个sRNA的转录水平第37页
        3.6 在不同的应激条件下8个sRNA的转录水平第37-41页
        3.7 Northern Blot第41页
        3.8 RACE检测EsR240起始位点和终止位点第41-42页
        3.9 EsR240的保守性预测第42-43页
        3.10 Et菌EsR240的靶标基因预测第43-44页
    4 讨论第44-47页
第二章 迟缓爱德华菌EsR240缺失株与互补株的构建第47-60页
    1 材料第47-48页
        1.1 菌株及质粒第47页
        1.2 主要试剂及配方第47页
        1.3 主要仪器及设备第47-48页
    2 方法第48-54页
        2.1 利用自杀质粒来构建EsR240基因的缺失株第48-52页
        2.2 接合第52-53页
        2.3 蔗糖平板的筛选第53页
        2.4 构建互补菌株第53-54页
    3 结果第54-58页
        3.1 获取EsR240上游片断F1和下游片断F2的融合片段F1-F2第54-55页
        3.2 重组自杀质粒pHM5-F1-F2的鉴定第55-56页
        3.3 接合子的鉴定第56页
        3.4 EsR240缺失株的筛选和鉴定第56-57页
        3.5 EsR240互补株的鉴定第57-58页
    4 讨论第58-60页
第三章 EsR240影响迟缓爱德华菌体内外生长及毒力第60-72页
    1 材料第60页
        1.1 实验菌株第60页
        1.2 实验动物第60页
        1.3 主要仪器第60页
    2 方法第60-62页
        2.1 细菌在液体LB培养基生长曲线的检测第60页
        2.2 细菌在体外应激条件下存活实验第60-61页
        2.3 细菌在巨噬胞内存活实验第61页
        2.4 细菌在小鼠体内存活实验第61-62页
        2.5 细菌引起小鼠器官的病理学改变第62页
        2.6 半数致死量(LD50)的测定第62页
    3 结果第62-70页
        3.1 比较Et野生株和EsR240缺失株在LB生长曲线的差异第62-63页
        3.2 Et野生株和EsR240缺失株在体外应激条件下存活的差异第63页
        3.3 比较Et野生株和EsR240缺失株在巨噬细胞内存活的差异第63-64页
        3.4 比较Et野生株和EsR240缺失株在小鼠肝脏、脾脏和肾脏中的存活能力第64-67页
        3.5 比较Et野生株和EsR240缺失株感染后小鼠肝脏、脾脏和肾脏的病理学变化的差异第67-69页
        3.6 比较Et野生株和EsR240缺失株对小鼠半数致死量(LD50)的差异第69-70页
    4 讨论第70-72页
结论第72-73页
参考文献第73-78页
作者简介第78-79页
致谢第79页

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