中文摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
符号说明 | 第11-12页 |
第一章 前言 | 第12-29页 |
第一节 白念珠菌的基本特性及其致病性 | 第12-14页 |
第二节 白念珠菌的形态发生 | 第14-16页 |
第三节 内质网压力应答机制 | 第16-24页 |
1.3.1 内质网压力 | 第16页 |
1.3.2 内质网压力应答概述 | 第16-17页 |
1.3.3 内质网压力应答途径 | 第17-24页 |
第四节 Ysy6及其同源蛋白的研究进展 | 第24-26页 |
第五节 选题依据及技术路线 | 第26-29页 |
1.5.1 选题依据 | 第26-27页 |
1.5.2 技术路线 | 第27-29页 |
第二章 材料与方法 | 第29-54页 |
第一节 实验材料 | 第29-39页 |
2.1.1 实验菌株 | 第29-30页 |
2.1.2 质粒 | 第30-31页 |
2.1.3 引物 | 第31-32页 |
2.1.4 实验动物 | 第32页 |
2.1.5 实验细胞 | 第32-33页 |
2.1.6 实验仪器 | 第33页 |
2.1.7 实验试剂 | 第33-34页 |
2.1.8 培养基 | 第34-36页 |
2.1.9 实验溶液 | 第36-39页 |
第二节 实验方法 | 第39-54页 |
2.2.1 白念珠菌的活化 | 第39页 |
2.2.2 白念珠菌的转化(醋酸锂转化法) | 第39-40页 |
2.2.3 白念珠菌基因组的提取 | 第40-41页 |
2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
2.2.5 PCR反应体系及程序 | 第41-42页 |
2.2.6 酶切体系 | 第42页 |
2.2.7 DNA连接体系 | 第42页 |
2.2.8 白念珠菌的基因敲除 | 第42-44页 |
2.2.9 白念珠菌Ysy6的细胞学定位 | 第44-45页 |
2.2.10 白念珠菌的压力敏感性测定 | 第45页 |
2.2.11 白念珠菌在药物处理下的液体生长测定 | 第45页 |
2.2.12 分泌型酸性磷酸酶(SAPs)糖基化水平的测定 | 第45-46页 |
2.2.13 碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色 | 第46页 |
2.2.14 液泡膜通透性(vacuolar membrane permeability, VMP)的测定 | 第46页 |
2.2.15 线粒体膜电势(mitochondrial membrane potential, MMP)测定 | 第46-47页 |
2.2.16 ATP含量的测定 | 第47页 |
2.2.17 胞内ROS的测定 | 第47页 |
2.2.18 白念珠菌RNA的提取纯化、c DNA的合成检验 | 第47-49页 |
2.2.19 实时定量PCR | 第49-50页 |
2.2.20 Western Blotting | 第50-51页 |
2.2.21 HAC1 m RNA剪接分析 | 第51页 |
2.2.22 白念珠菌的菌丝诱导 | 第51页 |
2.2.23 白念珠菌絮凝能力的测定 | 第51-52页 |
2.2.24 白念珠菌黏附能力的测定 | 第52页 |
2.2.25 白念珠菌生物膜形成能力的测定 | 第52页 |
2.2.26 胞外水解酶分泌能力的检测 | 第52页 |
2.2.27 白念珠菌与巨噬细胞之间相互作用能力的测定 | 第52-53页 |
2.2.28 小鼠系统性感染能力测定 | 第53-54页 |
第三章 结果与分析 | 第54-80页 |
第一节 白念珠菌Ysy6蛋白的鉴定 | 第54-60页 |
3.1.1 白念珠菌Ysy6蛋白序列分析 | 第54页 |
3.1.2 白念珠菌YSY6基因敲除及回补菌株的构建 | 第54-58页 |
3.1.3 白念珠菌Ysy6蛋白的定位 | 第58页 |
3.1.4 双缺菌株atg8Δ/Δysy6Δ/Δ 的构建 | 第58-60页 |
第二节 Ysy6和Atg8对内质网功能的影响 | 第60-65页 |
3.2.1 YSY6和ATG8基因缺失对各种离子压力敏感性的影响 | 第60-61页 |
3.2.2 YSY6和ATG8基因缺失对蛋白糖基化功能的影响 | 第61-62页 |
3.2.3 YSY6和ATG8缺失对衣霉素敏感性的影响 | 第62-64页 |
3.2.4 YSY6和ATG8缺失在TN条件下对质膜损伤和液泡膜通透性的影响 | 第64-65页 |
第三节 Ysy6和Atg8在内质网压力应答中的功能 | 第65-72页 |
3.3.1 YSY6和ATG8缺失在TN条件下对ROS和抗氧化系统的影响 | 第65-66页 |
3.3.2 YSY6和ATG8缺失在TN条件下对线粒体形态和功能的影响 | 第66-68页 |
3.3.3 YSY6和ATG8同时缺失在TN条件下对UPR途径的影响 | 第68-70页 |
3.3.4 YSY6和ATG8缺失在TN条件下对内质网自噬的影响 | 第70-72页 |
第四节 Ysy6和Atg8对形态发生的影响 | 第72-75页 |
3.4.1 YSY6和ATG8缺失对菌丝发育能力的影响 | 第72页 |
3.4.2 YSY6和ATG8缺失对絮凝能力的影响 | 第72-73页 |
3.4.3 YSY6和ATG8缺失对黏附能力和生物膜形成能力的影响 | 第73-74页 |
3.4.4 YSY6和ATG8缺失对白念珠菌嵌入式生长能力的影响 | 第74-75页 |
第五节 Ysy6和Atg8在白念珠菌致病方面的功能 | 第75-80页 |
3.5.1 YSY6和ATG8缺失对胞外水解酶分泌能力的影响 | 第75-76页 |
3.5.2 YSY6和ATG8缺失对白念珠菌与巨噬细胞相互作用的影响 | 第76-77页 |
3.5.3 YSY6和ATG8缺失对白念珠菌系统性感染小鼠能力的影响 | 第77-80页 |
第四章 讨论 | 第80-85页 |
第一节 白念珠菌Ysy6的序列和功能分析 | 第80-81页 |
第二节 白念珠菌Ysy6和Atg8对内质网功能维持的影响 | 第81-82页 |
第三节 白念珠菌Ysy6和Atg8与内质网压力应答的关系 | 第82-84页 |
第四节 Ysy6和Atg8对白念珠菌形态发生及致病性的影响 | 第84-85页 |
第五章 结论与展望 | 第85-87页 |
第一节 结论 | 第85页 |
第二节 论文的主要特色和创新点 | 第85-86页 |
第三节 展望 | 第86-87页 |
参考文献 | 第87-97页 |
致谢 | 第97-98页 |
个人简历及在学期间发表的学术论文 | 第98-99页 |