| 摘要 | 第4-10页 |
| Abstract | 第10-17页 |
| 主要中英文缩略词表 | 第18-22页 |
| 第一章 引言 | 第22-34页 |
| 1 甲状腺素 | 第22-25页 |
| 1.1 甲状腺素的发现 | 第22-23页 |
| 1.2 甲状腺素的合成和分泌 | 第23-24页 |
| 1.3 甲状腺素的生理作用 | 第24页 |
| 1.4 甲状腺素的作用机制和甲状腺素受体的发现 | 第24-25页 |
| 2 甲状腺素受体 | 第25-29页 |
| 2.1 甲状腺素受体的结构和分类 | 第25-26页 |
| 2.2 甲状腺素受体在组织和细胞中的分布 | 第26页 |
| 2.3 甲状腺素受体的生理功能 | 第26-28页 |
| 2.3.1 TR的基因受体作用 | 第26-27页 |
| 2.3.2 TR的非基因受体作用 | 第27-28页 |
| 2.4 甲状腺素受体的共作用因子 | 第28-29页 |
| 3 甲状腺素和甲状腺素受体在鱼类早期发育中的作用 | 第29-31页 |
| 4 研究目的和意义 | 第31-34页 |
| 第二章 牙鲆变态过程中甲状腺素受体与脱碘酶表达的关系 | 第34-55页 |
| 1 材料与方法 | 第34-40页 |
| 1.1 动物实验和取样 | 第34-35页 |
| 1.2 试验试剂 | 第35-36页 |
| 1.3 试剂的配制 | 第36页 |
| 1.4 主要试验器材 | 第36-37页 |
| 1.5 试验方法 | 第37-40页 |
| 1.5.1 总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 1.5.2 反转录制备cDNA | 第38页 |
| 1.5.3 引物设计 | 第38-39页 |
| 1.5.4 荧光定量PCR | 第39-40页 |
| 1.5.5 四碘甲状腺原氨酸T4和三碘甲状腺原氨酸T3的酶联免疫吸附试验 | 第40页 |
| 2 试验结果 | 第40-52页 |
| 2.1 总RNA的提取和鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2 牙鲆变态发育过程中脱碘酶在体内的表达 | 第41-42页 |
| 2.3 牙鲆变态发育过程中体内甲状腺素受体的表达 | 第42-43页 |
| 2.4 变态期间牙鲆体内T4和T3整体水平的变化 | 第43-44页 |
| 2.5 外源TH处理及其对牙鲆脱碘酶和甲状腺素受体表达的影响 | 第44-50页 |
| 2.6 TU处理组牙鲆的变态拯救 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| 3.1 脱碘酶和甲状腺素受体在牙鲆变态过程中的表达 | 第52-53页 |
| 3.2 外源TH和TU处理对牙鲆变态过程中脱碘酶和甲状腺素受体表达水平的影响 | 第53-54页 |
| 3.3 变态拯救 | 第54-55页 |
| 第三章 甲状腺素受体结合蛋白的鉴定及其受甲状腺素调控的变化 | 第55-78页 |
| 1 材料与方法 | 第55-65页 |
| 1.1 试验试剂 | 第55-57页 |
| 1.2 试验主要器材 | 第57-58页 |
| 1.3 试验方法 | 第58-65页 |
| 1.3.1 细胞培养 | 第58页 |
| 1.3.2 牙鲆TRβ多克隆抗体的制备 | 第58-59页 |
| 1.3.3 TRβ在牙鲆胚胎细胞中的过表达 | 第59-63页 |
| 1.3.3.1 TRβmRNA编码区(CDS)全序列的扩增 | 第59-60页 |
| 1.3.3.2 双酶切 | 第60-61页 |
| 1.3.3.3 连接及转化 | 第61页 |
| 1.3.3.4 重组质粒的鉴定和扩增抽提 | 第61页 |
| 1.3.3.5 pEGFP-N1-TRβ转染细胞 | 第61页 |
| 1.3.3.6 RT-qPCR及WesternBlot检测转染细胞中TRβ的表达 | 第61-63页 |
| 1.3.4 免疫沉淀 | 第63页 |
| 1.3.5 WesternBlot检测IP复合物 | 第63-64页 |
| 1.3.6 质谱检测IP复合物 | 第64-65页 |
| 1.3.7 RT-qPCR分析TRβ候选相互作用蛋白的mRNA在牙鲆变态过程中的表达及其对外源激素处理的反应 | 第65页 |
| 2 试验结果 | 第65-75页 |
| 2.1 牙鲆TRβ多克隆抗体的制备 | 第65-66页 |
| 2.1.1 TRβ多克隆抗体的质量检验 | 第65-66页 |
| 2.1.2 TRβ多克隆抗体用于牙鲆组织蛋白和胚胎细胞蛋白的WesternBlot分析 | 第66页 |
| 2.2 TRβ在牙鲆胚胎细胞中的过表达 | 第66-69页 |
| 2.2.1 牙鲆TRβ真核表达载体的构建 | 第66-67页 |
| 2.2.2 pEGFP-N1-TRβ重组质粒转染牙鲆胚胎细胞 | 第67-68页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR和WesternBlot检测转染牙鲆胚胎细胞中TRβ的表达 | 第68-69页 |
| 2.3 免疫沉淀 | 第69-75页 |
| 2.3.1 WesternBlot检测免疫沉淀复合物 | 第69-70页 |
| 2.3.2 液质联用质谱法检测IP复合物 | 第70-73页 |
| 2.3.3 可信蛋白在牙鲆变态过程中的表达及其对外源激素刺激的反应 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-78页 |
| 第四章 牙鲆变态过程中蛋白质组受外源性甲状腺素影响的变化 | 第78-96页 |
| 1 材料与方法 | 第78-84页 |
| 1.1 动物试验和采样 | 第78页 |
| 1.2 试验试剂 | 第78-79页 |
| 1.3 试验试剂的配制 | 第79-80页 |
| 1.4 试验主要器材 | 第80-81页 |
| 1.5 试验方法 | 第81-84页 |
| 1.5.1 制备蛋白质样品并用TMT试剂标记 | 第81-82页 |
| 1.5.2 肽段混合物的高效液相色谱分离 | 第82页 |
| 1.5.3 LC-MS/MS在线分析肽段混合物 | 第82页 |
| 1.5.4 数据处理和分析 | 第82页 |
| 1.5.5 实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹 | 第82-83页 |
| 1.5.6 生物信息学分析 | 第83-84页 |
| 2 试验结果 | 第84-94页 |
| 2.1 试验鱼的生长状态 | 第84-85页 |
| 2.2 通过TMT定量分析鉴定的TH处理和自然发育的牙鲆之间差异表达的蛋白 | 第85-86页 |
| 2.3 差异表达蛋白的亚细胞定位 | 第86页 |
| 2.4 通过定量实时PCR和Western印迹验证差异表达的蛋白质 | 第86-87页 |
| 2.5 通过GO和KEGG通路富集分析评估差异表达的蛋白质 | 第87-92页 |
| 2.6 蛋白互作分析 | 第92-94页 |
| 3 讨论 | 第94-96页 |
| 总结和展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-108页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
