中文摘要 | 第10-12页 |
ABSTRACT | 第12-14页 |
第一章 文献综述 | 第15-19页 |
1.1 引言 | 第15页 |
1.2 多发性骨骺发育不良(MED) | 第15-16页 |
1.2.1 MED概述 | 第15页 |
1.2.2 MED的临床特征 | 第15-16页 |
1.2.3 MED的发病机理 | 第16页 |
1.3 软骨寡聚物基质蛋白(COMP) | 第16-18页 |
1.3.1 COMP概述 | 第16-17页 |
1.3.2 COMP基因突变的研究 | 第17页 |
1.3.3 COMP基因突变与MED关系 | 第17-18页 |
1.3.4 抗氧化剂对COMP突变蛋白的影响 | 第18页 |
1.4 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
第二章 COMP基因突变导致MED发生 | 第19-24页 |
2.1 引言 | 第19页 |
2.2 研究对象、实验材料与仪器 | 第19-20页 |
2.2.1 研究对象及实验材料 | 第19页 |
2.2.2 实验主要设备及仪器 | 第19-20页 |
2.3 实验方法 | 第20页 |
2.3.1 临床回顾及家系分析 | 第20页 |
2.3.2 血液基因组DNA的提取 | 第20页 |
2.3.3 全外显子测序 | 第20页 |
2.3.4 桑格尔测序验证突变位点 | 第20页 |
2.4 结果与讨论 | 第20-24页 |
2.4.1 临床信息回顾及家系分析结果 | 第20-21页 |
2.4.2 基因分析结果 | 第21-22页 |
2.4.3 讨论 | 第22-24页 |
第三章 COMP突变蛋白的功能分析 | 第24-45页 |
3.1 引言 | 第24页 |
3.2 实验材料与仪器 | 第24-27页 |
3.2.1 实验细胞、材料及主要试剂 | 第24-25页 |
3.2.2 实验主要设备及仪器 | 第25-26页 |
3.2.3 实验主要溶液配制方法 | 第26-27页 |
3.3 实验方法 | 第27-35页 |
3.3.1 超级感受态细胞制备 | 第27-28页 |
3.3.2 定点突变实验 | 第28-29页 |
3.3.3 FLAG标签质粒和慢病毒质粒构建 | 第29-31页 |
3.3.4 细胞培养和细胞转染 | 第31页 |
3.3.5 重组COMP慢病毒系统构建和病毒转导 | 第31-32页 |
3.3.6 流式细胞术分析细胞模型的阳性率 | 第32页 |
3.3.7 Westernblot实验 | 第32-33页 |
3.3.8 免疫荧光染色实验 | 第33页 |
3.3.9 RNA提取和cDNA合成 | 第33-34页 |
3.3.10 实时荧光定量PCR实验 | 第34-35页 |
3.4 结果与讨论 | 第35-45页 |
3.4.1 COMP重组质粒的突变以及FLAG真核表达载体的构建 | 第35-36页 |
3.4.2 稳定表达COMP的HeLa细胞模型的建立 | 第36-37页 |
3.4.3 突变型COMP蛋白在内质网上发生滞留 | 第37-42页 |
3.4.4 突变型COMP蛋白的分泌和转运受损 | 第42-43页 |
3.4.5 COMP突变不影响其mRNA水平变化 | 第43-44页 |
3.4.6 讨论 | 第44-45页 |
第四章 基于COMP报告基因的抗氧化药物筛选 | 第45-52页 |
4.1 引言 | 第45页 |
4.2 实验材料与仪器 | 第45页 |
4.2.1 实验细胞、材料及主要试剂 | 第45页 |
4.2.2 实验仪器及试剂配制 | 第45页 |
4.3 实验方法 | 第45-46页 |
4.3.1 细胞培养 | 第45-46页 |
4.3.2 药物处理实验 | 第46页 |
4.4 结果与讨论 | 第46-52页 |
4.4.1 突变引起细胞内COMP的含量升高 | 第46-47页 |
4.4.2 乙酰水杨酸(ASA)作用细胞模型的最适浓度和最佳时间 | 第47-49页 |
4.4.3 白藜芦醇(Res)作用细胞模型的最适浓度和最佳时间 | 第49-50页 |
4.4.4 讨论 | 第50-52页 |
总结与展望 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-59页 |
攻读学位期间取得的研究成果 | 第59-60页 |
致谢 | 第60-61页 |
个人简况及联系方式 | 第61-64页 |