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COMP基因突变致病的机制研究及药物筛选

中文摘要第10-12页
ABSTRACT第12-14页
第一章 文献综述第15-19页
    1.1 引言第15页
    1.2 多发性骨骺发育不良(MED)第15-16页
        1.2.1 MED概述第15页
        1.2.2 MED的临床特征第15-16页
        1.2.3 MED的发病机理第16页
    1.3 软骨寡聚物基质蛋白(COMP)第16-18页
        1.3.1 COMP概述第16-17页
        1.3.2 COMP基因突变的研究第17页
        1.3.3 COMP基因突变与MED关系第17-18页
        1.3.4 抗氧化剂对COMP突变蛋白的影响第18页
    1.4 本研究的目的和意义第18-19页
第二章 COMP基因突变导致MED发生第19-24页
    2.1 引言第19页
    2.2 研究对象、实验材料与仪器第19-20页
        2.2.1 研究对象及实验材料第19页
        2.2.2 实验主要设备及仪器第19-20页
    2.3 实验方法第20页
        2.3.1 临床回顾及家系分析第20页
        2.3.2 血液基因组DNA的提取第20页
        2.3.3 全外显子测序第20页
        2.3.4 桑格尔测序验证突变位点第20页
    2.4 结果与讨论第20-24页
        2.4.1 临床信息回顾及家系分析结果第20-21页
        2.4.2 基因分析结果第21-22页
        2.4.3 讨论第22-24页
第三章 COMP突变蛋白的功能分析第24-45页
    3.1 引言第24页
    3.2 实验材料与仪器第24-27页
        3.2.1 实验细胞、材料及主要试剂第24-25页
        3.2.2 实验主要设备及仪器第25-26页
        3.2.3 实验主要溶液配制方法第26-27页
    3.3 实验方法第27-35页
        3.3.1 超级感受态细胞制备第27-28页
        3.3.2 定点突变实验第28-29页
        3.3.3 FLAG标签质粒和慢病毒质粒构建第29-31页
        3.3.4 细胞培养和细胞转染第31页
        3.3.5 重组COMP慢病毒系统构建和病毒转导第31-32页
        3.3.6 流式细胞术分析细胞模型的阳性率第32页
        3.3.7 Westernblot实验第32-33页
        3.3.8 免疫荧光染色实验第33页
        3.3.9 RNA提取和cDNA合成第33-34页
        3.3.10 实时荧光定量PCR实验第34-35页
    3.4 结果与讨论第35-45页
        3.4.1 COMP重组质粒的突变以及FLAG真核表达载体的构建第35-36页
        3.4.2 稳定表达COMP的HeLa细胞模型的建立第36-37页
        3.4.3 突变型COMP蛋白在内质网上发生滞留第37-42页
        3.4.4 突变型COMP蛋白的分泌和转运受损第42-43页
        3.4.5 COMP突变不影响其mRNA水平变化第43-44页
        3.4.6 讨论第44-45页
第四章 基于COMP报告基因的抗氧化药物筛选第45-52页
    4.1 引言第45页
    4.2 实验材料与仪器第45页
        4.2.1 实验细胞、材料及主要试剂第45页
        4.2.2 实验仪器及试剂配制第45页
    4.3 实验方法第45-46页
        4.3.1 细胞培养第45-46页
        4.3.2 药物处理实验第46页
    4.4 结果与讨论第46-52页
        4.4.1 突变引起细胞内COMP的含量升高第46-47页
        4.4.2 乙酰水杨酸(ASA)作用细胞模型的最适浓度和最佳时间第47-49页
        4.4.3 白藜芦醇(Res)作用细胞模型的最适浓度和最佳时间第49-50页
        4.4.4 讨论第50-52页
总结与展望第52-53页
参考文献第53-59页
攻读学位期间取得的研究成果第59-60页
致谢第60-61页
个人简况及联系方式第61-64页

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