| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 柑橘黄龙病发生与危害 | 第12-13页 |
| 1.2 HLB病菌 | 第13-16页 |
| 1.2.1 分类地位及遗传多样性研究 | 第13-15页 |
| 1.2.2 基因组结构特点及致病机理 | 第15-16页 |
| 1.3 外膜蛋白研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 OMPs的结构和功能 | 第16-17页 |
| 1.3.2 肽聚糖相关脂蛋白 | 第17-18页 |
| 1.4 亚细胞定位 | 第18-19页 |
| 1.5 植物抗病反应的信号通路 | 第19-21页 |
| 1.5.1 植物的先天性免疫系统 | 第19-20页 |
| 1.5.2 免疫反应信号通路 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 CaLas外膜蛋白基因MotB及△tMotB在本氏烟中的亚细胞定位及表达分析 | 第22-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-29页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要供试菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 目的基因引物设计及扩增 | 第22-23页 |
| 2.1.5 DNA片段的回收与纯化 | 第23-24页 |
| 2.1.6 Gateway技术BP反应及LR反应 | 第24-25页 |
| 2.1.7 质粒的小量提取 | 第25页 |
| 2.1.8 根癌农杆菌GV3101感受态的制备 | 第25-26页 |
| 2.1.9 热击转化农杆菌GV3101菌株及阳性鉴定 | 第26页 |
| 2.1.10 根癌农杆菌诱导接种本氏烟及瞬时表达 | 第26-27页 |
| 2.1.11 样品采集 | 第27页 |
| 2.1.12 植物总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.1.13 DNA消化 | 第27-28页 |
| 2.1.14 反转录合成cDNA | 第28-29页 |
| 2.1.15 qRT-PCR的扩增 | 第29页 |
| 2.2 结果与分析 | 第29-37页 |
| 2.2.1 入门载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.2 表达载体的构建及目的基因序列分析 | 第30页 |
| 2.2.3 重组载体转化农杆菌阳性鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.4 MotB及△tMotB基因引起的本氏烟表型 | 第31-32页 |
| 2.2.5 MotB及△tMotB基因在本氏烟中的亚细胞定位 | 第32-35页 |
| 2.2.6 MotB与△ tMotB基因引起的防卫相关基因表达分析 | 第35-37页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 CaLas外膜蛋白基因原核表达及多克隆抗体的制备 | 第38-52页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-45页 |
| 3.1.1 主要供试菌株、质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 目的基因引物设计及PCR扩增 | 第38-39页 |
| 3.1.4 MotB基因蛋白结构预测 | 第39页 |
| 3.1.5 目的片段TA克隆 | 第39页 |
| 3.1.6 E.coli感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| 3.1.7 热击转化大肠杆菌及阳性转化子的鉴定 | 第40页 |
| 3.1.8 原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.1.9 目的基因的原核诱导表达 | 第41-42页 |
| 3.1.10 SDS-PAGE检测 | 第42-43页 |
| 3.1.11 诱导表达蛋白可溶性分析 | 第43页 |
| 3.1.12 Western blot分析 | 第43-44页 |
| 3.1.13 目标蛋白的纯化 | 第44页 |
| 3.1.14 多克隆抗体的制备 | 第44-45页 |
| 3.2 结果与分析 | 第45-51页 |
| 3.2.1 MotB基因蛋白结构预测 | 第45-46页 |
| 3.2.2 MotB基因原核表达载体的构建 | 第46页 |
| 3.2.3 MotB基因原核表达载体的诱导表达及条件筛选 | 第46-48页 |
| 3.2.4 MotB基因原核表达产物的Western blot分析 | 第48-49页 |
| 3.2.5 重组蛋白的纯化及多克隆抗体效价 | 第49-51页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 CaLas外膜蛋白在E.coli中定位及泌出性分析 | 第52-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第52-55页 |
| 4.1.1 主要试剂、载体及仪器 | 第52页 |
| 4.1.2 引物设计 | 第52页 |
| 4.1.3 基因的扩增 | 第52-53页 |
| 4.1.4 目的基因和目的载体的处理 | 第53-54页 |
| 4.1.5 构建含有GFP的重组载体 | 第54-55页 |
| 4.1.6 目的基因MotB及△tMotB在E.coli中诱导表达 | 第55页 |
| 4.1.7 目的基因蛋白MotB在大肠杆菌中的泌出性分析 | 第55页 |
| 4.1.8 目的基因蛋白MotB及△tMotB在大肠杆菌中的定位 | 第55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-61页 |
| 4.3.1 MotB及△tMotB基因原核定位载体的构建 | 第55-57页 |
| 4.3.2 MotB-1GFP及△tMotB-1GFP重组载体在E.coli中诱导表达 | 第57-58页 |
| 4.3.3 MotB蛋白在E.coli中泌出性分析 | 第58-59页 |
| 4.3.4 MotB及△tMotB蛋白在大肠杆菌中定位 | 第59-61页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 附录1: pMD 18-T载体信息 | 第72-73页 |
| 附录2: pET-22b(+)载体图谱及多克隆位点信息 | 第73-74页 |
| 附录3: pET-28a(+)与pET-28b(+)载体图谱及多克隆位点信息 | 第74-75页 |
| 附录4: pET His6 GFP TEV LIC cloning vector (1GFP)载体图谱及信息 | 第75-76页 |
| 附录5: 主要试剂及溶液的配置 | 第76-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
