| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-26页 |
| 1 无浆体病研究进展 | 第10-17页 |
| ·病原体 | 第10-11页 |
| ·流行病学 | 第11页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第11-12页 |
| ·临床症状 | 第11-12页 |
| ·病理变化 | 第12页 |
| ·表面蛋白 | 第12-14页 |
| ·免疫机制 | 第14-15页 |
| ·诊断 | 第15-17页 |
| ·常规检查 | 第15页 |
| ·学清学诊断 | 第15-16页 |
| ·分子生物学检测 | 第16-17页 |
| 2 荧光定量PCR检测技术 | 第17-20页 |
| ·常见定量PCR方法 | 第19-20页 |
| ·内参照法 | 第19页 |
| ·竞争法 | 第19页 |
| ·PCR-ELISA法 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-26页 |
| 第二章 边缘无浆体长沙株的MSP4基因的克隆及序列分析 | 第26-38页 |
| 1 材料与方法 | 第26-31页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·样品 | 第26-27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·载体 | 第27页 |
| ·仪器及设备 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·涂片镜检 | 第28页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·样品DNA的制备 | 第28-29页 |
| ·PCR扩增 | 第29页 |
| ·样品PCR扩增产物的回收与纯 | 第29-30页 |
| ·扩增片段的克隆及筛选 | 第30页 |
| ·序列测定 | 第30页 |
| ·序列分析 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-35页 |
| ·血涂片结果 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增结果 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆鉴定结果 | 第33页 |
| ·测序结果及分析 | 第33-35页 |
| ·MSP4基因序列同源性比较 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-38页 |
| 第三章 边缘无浆体SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的初步建立 | 第38-52页 |
| 1 材料与方法 | 第38-44页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·毒株及菌种 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38-39页 |
| ·仪器与设备 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-44页 |
| ·引物设计和合成 | 第39页 |
| ·边缘无浆体基因组的提取 | 第39页 |
| ·常规PCR以及产物回收 | 第39-40页 |
| ·PCR产物的连接 | 第40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第42页 |
| ·定量标准曲线的建立 | 第42-44页 |
| ·标准质粒的制备 | 第42-43页 |
| ·扩增曲线的建立 | 第43页 |
| ·SYBR GREENⅠ荧光定量PCR的反应条件 | 第43-44页 |
| ·实时荧光定量PCR的特异性、敏感性、重复性的检测 | 第44页 |
| ·标准曲线的建立 | 第44页 |
| ·熔解曲线的建立 | 第44页 |
| ·临床样品检测结果 | 第44页 |
| 2 结果 | 第44-49页 |
| ·PCR扩增结果 | 第44-45页 |
| ·阳性克隆鉴定结果 | 第45页 |
| ·荧光定量PCR反应体系优化结果 | 第45-46页 |
| ·标准品扩增曲线 | 第46页 |
| ·标准曲线 | 第46-47页 |
| ·溶解曲线分析 | 第47页 |
| ·标准品重复性检测 | 第47-48页 |
| ·特异性检测 | 第48页 |
| ·临床样本检测结果 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-52页 |
| 第四章 全文总结 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-55页 |
| 缓冲液及其它溶液 | 第53-55页 |
| 符号说明 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
