| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 露地菊的由来及应用 | 第10页 |
| 1.2 植物抗寒生理的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2.1 丙二醛、脯氨酸含量与植物抗寒性的关系 | 第10-11页 |
| 1.2.2 酶系统与植物抗寒性间的关系 | 第11-12页 |
| 1.2.3 相对电导率与植物抗寒性间的关系 | 第12页 |
| 1.3 植物抗寒分子机制的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.3.1 植物寒信号响应的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.2 植物抗寒信号转导途径的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.3 ICE基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 转基因技术中安全标记基因的研究 | 第16-18页 |
| 1.4.1 可视化的安全标记基因 | 第16-17页 |
| 1.4.2 糖代谢相关的安全标记基因 | 第17页 |
| 1.4.3 其它安全标记基因 | 第17-18页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 露地菊抗寒基因的克隆 | 第19-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.2 试验试剂 | 第19页 |
| 2.3 试验方法 | 第19-23页 |
| 2.3.1 露地菊总RNA的提取 | 第19页 |
| 2.3.2 露地菊总RNA的电泳检测 | 第19-20页 |
| 2.3.3 反转录合成cDNA | 第20页 |
| 2.3.4 PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.3.5 PCR产物的回收纯化 | 第21页 |
| 2.3.6 PCR产物与载体的连接与转化 | 第21-22页 |
| 2.3.7 阳性克隆的挑取、检测与测序 | 第22-23页 |
| 2.3.8 抗寒基因的生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.4 结果与分析 | 第23-29页 |
| 2.4.1 露地菊总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.4.2 抗寒基因全长的PCR扩增及序列测定 | 第23-26页 |
| 2.4.3 抗寒基因的生物信息学分析 | 第26-29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-30页 |
| 2.6 本章小结 | 第30-31页 |
| 3 露地菊抗寒基因的表达分析 | 第31-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第31页 |
| 3.2 试验试剂 | 第31页 |
| 3.3 试验方法 | 第31-33页 |
| 3.3.1 露地菊不同组织部位样品的采集 | 第31页 |
| 3.3.2 露地菊光周期测定样品的采集 | 第31页 |
| 3.3.3 露地菊的4℃处理方法及样品的采集 | 第31页 |
| 3.3.4 露地菊总RNA的提取及电泳检测 | 第31-32页 |
| 3.3.5 总RNA反转录为cDNA | 第32页 |
| 3.3.6 实时定量PCR | 第32-33页 |
| 3.4 结果与分析 | 第33-38页 |
| 3.4.1 抗寒基因的组织特异性表达 | 第33-34页 |
| 3.4.2 抗寒基因的光周期性表达 | 第34-36页 |
| 3.4.3 抗寒基因4℃处理下的表达 | 第36-38页 |
| 3.5 讨论 | 第38-39页 |
| 3.6 本章小结 | 第39-40页 |
| 4 CmICE1载体构建及遗传转化露地菊'火焰' | 第40-50页 |
| 4.1 试验材料 | 第40页 |
| 4.2 试验试剂 | 第40页 |
| 4.3 试验方法 | 第40-44页 |
| 4.3.1 引物设计 | 第40-41页 |
| 4.3.2 利用attB-CmICE1-F/R引物进行第一次PCR | 第41页 |
| 4.3.3 利用attB-adapter-F/R引物进行第二次PCR | 第41页 |
| 4.3.4 BP反应 | 第41-42页 |
| 4.3.5 LR反应 | 第42-43页 |
| 4.3.6 三亲杂交法转化农杆菌 | 第43页 |
| 4.3.7 培养基的配制 | 第43-44页 |
| 4.3.8 预培养 | 第44页 |
| 4.3.9 菌液侵染与共培养 | 第44页 |
| 4.3.10 甘露糖筛选培养 | 第44页 |
| 4.3.11 不定芽的生根培养 | 第44页 |
| 4.4 结果与分析 | 第44-47页 |
| 4.4.1 目的基因的两次PCR | 第44-45页 |
| 4.4.2 BP反应菌液PCR及测序检测 | 第45页 |
| 4.4.3 LR反应菌液PCR及测序检测 | 第45-46页 |
| 4.4.4 三亲杂交法转化农杆菌 | 第46-47页 |
| 4.4.5 露地菊'火焰'遗传转化 | 第47页 |
| 4.5 讨论 | 第47-49页 |
| 4.6 本章小结 | 第49-50页 |
| 5 抗性植株的分子检测及表型观察 | 第50-58页 |
| 5.1 露地菊抗性植株的PCR检测 | 第50-52页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第50页 |
| 5.1.2 试验试剂 | 第50页 |
| 5.1.3 试验方法 | 第50-51页 |
| 5.1.4 结果与分析 | 第51-52页 |
| 5.2 转基因植株相关基因表达量分析 | 第52-53页 |
| 5.2.1 试验材料 | 第52页 |
| 5.2.2 试验试剂 | 第52页 |
| 5.2.3 试验方法 | 第52页 |
| 5.2.4 结果与分析 | 第52-53页 |
| 5.3 转基因植株寒处理下相关基因表达量分析 | 第53-55页 |
| 5.3.1 试验材料 | 第53页 |
| 5.3.2 试验试剂 | 第53页 |
| 5.3.3 试验方法 | 第53页 |
| 5.3.4 结果与分析 | 第53-55页 |
| 5.4 转基因植株的表型观察 | 第55-56页 |
| 5.4.1 试验材料 | 第55页 |
| 5.4.2 试验试剂 | 第55页 |
| 5.4.3 试验方法 | 第55页 |
| 5.4.4 结果与分析 | 第55-56页 |
| 5.5 讨论 | 第56-57页 |
| 5.6 本章小结 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |