| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第1章 文献综述 衔接蛋白AP1M1研究进展 | 第12-18页 |
| 1.1 衔接蛋白AP1M1概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 衔接蛋白AP家族 | 第12-14页 |
| 1.1.2 AP1M1分子概述 | 第14页 |
| 1.2 AP1M1功能研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 AP1M1在细胞胞吐作用中的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.2 AP1M1在免疫系统中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.3 AP1M1在细胞胞吞作用中的功能 | 第16-17页 |
| 1.2.4 AP1M1在睾丸发育过程中的作用 | 第17-18页 |
| 第2章 引言 | 第18-20页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第18页 |
| 2.2 实验内容 | 第18页 |
| 2.3 技术路线 | 第18-20页 |
| 第3章 山羊AP1M1基因的克隆及序列分析 | 第20-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 3.1.1 动物材料 | 第20页 |
| 3.1.2 实验仪器设备 | 第20-21页 |
| 3.1.3 实验主要试剂 | 第21页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第21-22页 |
| 3.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第23页 |
| 3.2.3 cDNA的合成及内参基因检测 | 第23-24页 |
| 3.2.4 目的基因扩增 | 第24页 |
| 3.2.5 回收和纯化PCR产物 | 第24-25页 |
| 3.2.6 T-克隆载体连接 | 第25页 |
| 3.2.7 转化、涂板和挑斑 | 第25-26页 |
| 3.2.8 菌液PCR | 第26页 |
| 3.2.9 生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 3.3 实验结果 | 第27-38页 |
| 3.3.1 AP1M1基因克隆及鉴定 | 第27-28页 |
| 3.3.2 AP1M1序列分析 | 第28-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-41页 |
| 3.4.1 山羊AP1M1基因的克隆及序列分析 | 第38-39页 |
| 3.4.2 山羊AP1M1在进化中高度保守 | 第39-40页 |
| 3.4.3 山羊AP1M1序列特点对多克隆抗体制备的影响 | 第40-41页 |
| 3.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 山羊AP1M1分子的多克隆抗体制备 | 第42-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-46页 |
| 4.1.1 动物材料 | 第42页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第42-43页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第43-44页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第44-46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-54页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第46页 |
| 4.2.2 目的片段扩增及酶切 | 第46-47页 |
| 4.2.3 连接 | 第47页 |
| 4.2.4 转接 | 第47页 |
| 4.2.5 目的蛋白诱导表达 | 第47-48页 |
| 4.2.6 SDS-PAGE | 第48-49页 |
| 4.2.7 重组蛋白的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.2.8 包涵体的洗涤 | 第50页 |
| 4.2.9 包涵体的溶解 | 第50页 |
| 4.2.10 亲和纯化 | 第50-51页 |
| 4.2.11 透析干燥 | 第51页 |
| 4.2.12 蛋白浓度测定 | 第51-52页 |
| 4.2.13 血清制备 | 第52页 |
| 4.2.14 抗原免疫 | 第52-53页 |
| 4.2.15 效价检测 | 第53页 |
| 4.2.16 WesternBlotting | 第53-54页 |
| 4.3 实验结果 | 第54-60页 |
| 4.3.1 原核表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.3.2 pET30-AP1M1的诱导表达 | 第55-56页 |
| 4.3.3 AP1M1重组蛋白鉴定 | 第56页 |
| 4.3.4 包涵体的洗涤 | 第56-58页 |
| 4.3.5 包涵体的溶解 | 第58-59页 |
| 4.3.6 亲和纯化 | 第59页 |
| 4.3.7 效价及特异性检测 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 4.4.1 影响外源基因表达的因素 | 第60-61页 |
| 4.4.2 包涵体的形成与处理 | 第61-62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 第5章 山羊AP1M1的表达模式分析 | 第64-70页 |
| 5.1 实验材料 | 第64页 |
| 5.2 实验方法 | 第64-65页 |
| 5.2.1 荧光定量PCR | 第64-65页 |
| 5.2.2 WesternBlotting | 第65页 |
| 5.2.3 统计方法 | 第65页 |
| 5.3 实验结果 | 第65-68页 |
| 5.3.1 山羊睾丸不同发育时期形态外观 | 第65-66页 |
| 5.3.2 荧光定量引物效果检测 | 第66页 |
| 5.3.3 AP1M1在山羊不同组织间的转录表达模式分析 | 第66-67页 |
| 5.3.4 AP1M1在山羊不同组织间的蛋白表达模式分析 | 第67-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-69页 |
| 5.4.1 AP1M1在山羊组织中广泛分布 | 第68页 |
| 5.4.2 AP1M1在山羊睾丸发育中的作用 | 第68-69页 |
| 5.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 第6章 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 | 第78-86页 |
| 附录1 山羊AP1M1序列 | 第78-81页 |
| 附录2 原核表达载体测序结果 | 第81-82页 |
| 附图3 载体图谱 | 第82-83页 |
| 附录4 缩略词表 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
