| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第16-21页 |
| 1.1 胃癌的诊断和治疗 | 第16页 |
| 1.2 脑衰反应调节蛋白家族的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 脑衰反应调节蛋白简介 | 第16-17页 |
| 1.2.2 脑衰反应调节蛋白家族的功能 | 第17-18页 |
| 1.2.3 脑衰反应调节蛋白家族和肿瘤的关系 | 第18-19页 |
| 1.3 CRMP 4的功能及其和肿瘤的关系 | 第19-21页 |
| 第一部分：CRMP 4a与CRMP 4b在胃癌中的表达 | 第21-39页 |
| 1 材料和方法 | 第21-30页 |
| 1.1 材料 | 第21-24页 |
| 1.1.1 细胞 | 第21页 |
| 1.1.2 仪器和耗材 | 第21-22页 |
| 1.1.3 试剂 | 第22-23页 |
| 1.1.4 试剂配制 | 第23-24页 |
| 1.2 方法 | 第24-30页 |
| 1.2.1 病理组织收集 | 第24页 |
| 1.2.2 胃癌细胞的培养 | 第24-25页 |
| 1.2.3 qPCR检测 | 第25-27页 |
| 1.2.4 Western blot检测 | 第27-30页 |
| 1.3 数据统计 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-34页 |
| 2.1 RNA提取完整性检测 | 第30页 |
| 2.2 CRMP 4a在胃癌组织以及胃癌细胞中的表达 | 第30-32页 |
| 2.2.1 CRMP 4a在胃癌以及癌旁组织中的表达 | 第30-31页 |
| 2.2.2 CRMP 4a在胃癌细胞株和正常胃黏膜细胞中的表达 | 第31-32页 |
| 2.3 CRMP 4b在胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的表达 | 第32-34页 |
| 2.3.1 CRMP 4b在胃癌以及癌旁组织中的表达 | 第32-33页 |
| 2.3.2 CRMP 4b在胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的表达 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 4 结论 | 第35-36页 |
| 5 附图 | 第36-39页 |
| 第二部分：CRMP 4a过表达和CRMP 4b干扰稳定细胞株构建 | 第39-72页 |
| 1 材料方法 | 第39-58页 |
| 1.1 细胞株 | 第39页 |
| 1.2 仪器 | 第39-40页 |
| 1.3 试剂 | 第40页 |
| 1.4 CRMP 4b干扰稳定细胞株构建 | 第40-53页 |
| 1.4.1 CRMP 4b siRNA的设计与合成 | 第40-41页 |
| 1.4.2 si-CRMP 4b转染 | 第41-42页 |
| 1.4.3 qPCR检测si-CRMP 4b感染效率验证 | 第42-44页 |
| 1.4.4 western blot检测 | 第44-46页 |
| 1.4.5 慢病毒构建 | 第46-50页 |
| 1.4.6 病毒滴度复核(有限稀释法测定) | 第50页 |
| 1.4.7 感染胃癌细胞BGC823 | 第50-51页 |
| 1.4.8 杀伤曲线的检测 | 第51页 |
| 1.4.9 靶细胞感染预实验 | 第51-52页 |
| 1.4.10 感染方法 | 第52页 |
| 1.4.11 感染细胞最佳MOI的测定 | 第52页 |
| 1.4.12 稳定细胞株筛选 | 第52-53页 |
| 1.4.13 挑选克隆 | 第53页 |
| 1.5 CRMP 4a过表达稳定细胞株构建 | 第53-57页 |
| 1.5.1 CRMP 4a引物设计(苏州金唯智合成PAGE纯化) | 第53页 |
| 1.5.2 PCR钓取基因 | 第53-55页 |
| 1.5.3 PCR产物回收 | 第55页 |
| 1.5.4 PCR回收产物及载体双酶切 | 第55-56页 |
| 1.5.5 酶切产物回收 | 第56页 |
| 1.5.6 目段片段与载体连接 | 第56页 |
| 1.5.7 连接产物的转化 | 第56-57页 |
| 1.5.8 质粒酶切鉴定阳性克隆 | 第57页 |
| 1.5.9 测序比对 | 第57页 |
| 1.5.10 病毒包装以及稳定细胞株筛选 | 第57页 |
| 1.6 数据统计 | 第57-58页 |
| 2 结果 | 第58-64页 |
| 2.1 sh-CRMP 4b稳定细胞株构建成功 | 第58-61页 |
| 2.1.1 RNA提取完整性分析 | 第58页 |
| 2.1.2 si-CRMP 4b干扰序列选择 | 第58-59页 |
| 2.1.3 慢病毒载体构建测序结果 | 第59页 |
| 2.1.4 blast比对结果 | 第59-60页 |
| 2.1.5 转染后的细胞荧光观察 | 第60页 |
| 2.1.6 杀伤曲线分析 | 第60页 |
| 2.1.7 稳定细胞株筛选 | 第60页 |
| 2.1.8 qPCR检测CRMP 4b的表达 | 第60-61页 |
| 2.1.9 western blot检测BGC823稳定细胞株中CRMP 4b的表达 | 第61页 |
| 2.2 CRMP 4a过表达稳定细胞株构建成功 | 第61-64页 |
| 2.2.1 PCR产物切胶回收 | 第61-62页 |
| 2.2.2 测序结果以及比对结果 | 第62页 |
| 2.2.3 转染后的细胞荧光观察 | 第62页 |
| 2.2.4 杀伤曲线分析 | 第62页 |
| 2.2.5 稳定细胞株筛选 | 第62页 |
| 2.2.6 qPCR检测CRMP 4a的表达 | 第62-63页 |
| 2.2.7 Western blot检测CRMP 4a的表达 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 附图 | 第65-72页 |
| 第三部分：CRMP 4a和CRMP 4b对胃癌细胞生物学行为的影响 | 第72-98页 |
| 1 材料和方法 | 第72-79页 |
| 1.1 材料 | 第72-74页 |
| 1.1.1 细胞 | 第72页 |
| 1.1.2 仪器 | 第72-73页 |
| 1.1.3 试剂 | 第73-74页 |
| 1.2 方法 | 第74-79页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第74页 |
| 1.2.2 MTS法检测细胞增殖 | 第74页 |
| 1.2.3 流式细胞仪检测细胞周期 | 第74页 |
| 1.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第74-75页 |
| 1.2.5 Transwell检测细胞迁移能力 | 第75页 |
| 1.2.6 Transwell检测细胞侵袭能力 | 第75页 |
| 1.2.7 克隆形成实验 | 第75-76页 |
| 1.2.8 粘附实验 | 第76页 |
| 1.2.9 western blot检测 | 第76-79页 |
| 1.3 数据统计 | 第79页 |
| 2 结果 | 第79-88页 |
| 2.1 过表达CRMP 4a对MGC803细胞生物学行为的影响 | 第79-84页 |
| 2.1.1 过表达CRMP 4a对MGC803细胞增殖的影响 | 第79-80页 |
| 2.1.2 过表达CRMP 4a对MGC803细胞周期的影响 | 第80-81页 |
| 2.1.3 过表达CRMP 4a对MGC803细胞凋亡的影响 | 第81页 |
| 2.1.4 过表达CRMP 4a对MGC803细胞迁移的影响 | 第81-82页 |
| 2.1.5 过表达CRMP 4a对MGC803细胞侵袭的影响 | 第82页 |
| 2.1.6 过表达CRMP 4a对MGC803细胞粘附的影响 | 第82-83页 |
| 2.1.7 过表达CRMP 4a对MGC803细胞平板克隆的影响 | 第83页 |
| 2.1.8 过表达CRMP 4a对MGC803细胞凋亡相关基因的影响 | 第83-84页 |
| 2.2 抑制CRMP 4b的表达对BGC823细胞生物学行为的影响 | 第84-88页 |
| 2.2.1 沉默CRMP 4b对BGC823细胞增殖的影响 | 第84-85页 |
| 2.2.2 沉默CRMP 4b对BGC823细胞周期的影响 | 第85页 |
| 2.2.3 沉默CRMP 4b对BGC823细胞凋亡的影响 | 第85-86页 |
| 2.2.4 沉默CRMP 4b对BGC823细胞迁移的影响 | 第86页 |
| 2.2.5 沉默CRMP 4b对BGC823细胞侵袭的影响 | 第86-87页 |
| 2.2.6 沉默CRMP 4b对BGC823细胞粘附的影响 | 第87页 |
| 2.2.7 沉默CRMP 4b对BGC823细胞平板克隆的影响 | 第87-88页 |
| 2.2.8 沉默CRMP 4b对BGC823细胞凋亡相关基因的影响 | 第88页 |
| 3 讨论 | 第88-89页 |
| 4 结论 | 第89-90页 |
| 5 附图 | 第90-98页 |
| 第四部分：CRMP 4a和CRMP 4b对裸鼠胃癌模型的影响 | 第98-105页 |
| 1 材料和方法 | 第98-100页 |
| 1.1 材料 | 第98-99页 |
| 1.1.1 细胞和裸鼠 | 第98页 |
| 1.1.2 仪器 | 第98-99页 |
| 1.1.3 材料 | 第99页 |
| 1.2 方法 | 第99-100页 |
| 1.2.1 稳定细胞株构建参考第三部分 | 第99页 |
| 1.2.2 胃癌荷瘤动物模型建立 | 第99-100页 |
| 1.2.3 裸鼠观察及处理 | 第100页 |
| 1.3 数据统计 | 第100页 |
| 2 结果 | 第100-102页 |
| 2.1 瘤体生长曲线 | 第100-101页 |
| 2.2 瘤体体积 | 第101-102页 |
| 2.3 瘤体重量 | 第102页 |
| 3 讨论 | 第102-103页 |
| 4 结论 | 第103页 |
| 5 附图 | 第103-105页 |
| 第五部分：结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 文献综述 | 第114-127页 |
| 1 脑衰反应调节蛋白的简介 | 第114-116页 |
| 2 脑衰反应调节蛋白家族和肿瘤的关系 | 第116-120页 |
| 2.1 CRMP1和癌症 | 第116-117页 |
| 2.2 CRMP2和癌症 | 第117-118页 |
| 2.3 CRMP4和癌症 | 第118-119页 |
| 2.4 其他CRMPs和肿瘤 | 第119-120页 |
| 3 前景展望 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-127页 |
| 攻博期间发表的科研成果目录 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
