| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 Serpin的研究进展 | 第11-22页 |
| 摘要 | 第11页 |
| ·前言 | 第11页 |
| ·Serpin的命名和分类 | 第11-12页 |
| ·真核生物中Serpin的研究现状 | 第12-16页 |
| ·serpin基因结构 | 第12页 |
| ·Serpin的蛋白质结构 | 第12-13页 |
| ·Serpin的抑制机制 | 第13-15页 |
| ·真核生物中Serpin的研究进展 | 第15-16页 |
| ·原核生物中Serpin的研究现状 | 第16页 |
| ·双歧杆菌中Serpin的研究意义 | 第16-18页 |
| 参考文献(References) | 第18-22页 |
| 第二章 双歧杆菌serpin基因的克隆 | 第22-43页 |
| 摘要 | 第22页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·实验材料、设备与仪器 | 第22-25页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·仪器设备 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·试剂配制 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-35页 |
| ·双歧杆菌基因组DNA的提取与检测 | 第25-27页 |
| ·serpin基因的扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第28页 |
| ·目的基因与载体pMD18-T的连接 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆子菌落PCR验证 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的提取 | 第31页 |
| ·双酶切重组质粒鉴定阳性克隆 | 第31-32页 |
| ·测序 | 第32页 |
| ·DNA序列分析 | 第32页 |
| ·Southern印迹杂交DNA探针的标记(地高辛) | 第32-33页 |
| ·DNA的限制性内切酶消化及转膜 | 第33-34页 |
| ·杂交与显色 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-41页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第36页 |
| ·serpin基因的PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| ·PCR产物回收结果 | 第37页 |
| ·阳性克隆子的验证 | 第37-38页 |
| ·serpin基因的单核苷酸多态性(SNP)分析 | 第38-39页 |
| ·基因组DNA酶切效果 | 第39-40页 |
| ·Southern印迹杂交结果 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41页 |
| 参考文献(References) | 第41-43页 |
| 第三章 Serpin原核表达载体的构建及功能验证 | 第43-61页 |
| 摘要 | 第43页 |
| ·前言 | 第43页 |
| ·实验材料、设备及试剂 | 第43-45页 |
| ·菌株及质粒 | 第44页 |
| ·实验仪器设备及试剂 | 第44页 |
| ·常用试剂 | 第44-45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-52页 |
| ·引物设计与serpin基因的扩增 | 第45-46页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第46页 |
| ·双酶切及酶切产物纯化 | 第46-47页 |
| ·连接 | 第47页 |
| ·转化 | 第47页 |
| ·pBX_2-WBBI02阳性克隆子菌落PCR验证 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pBX_2-WBBI02的提取 | 第48页 |
| ·双酶切表达载体鉴定插阳性克隆 | 第48页 |
| ·目标蛋白的诱导表达及优化 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第50-51页 |
| ·Serpin蛋白的纯化 | 第51页 |
| ·Serpin对糜蛋白酶和弹性蛋白酶的抑制活性实验 | 第51页 |
| ·粘附实验 | 第51-52页 |
| ·结果 | 第52-58页 |
| ·Serpin的扩增结果 | 第52-53页 |
| ·pBX_2质粒的提取 | 第53页 |
| ·目的片段和表达载体双酶切产物的回收检测 | 第53-54页 |
| ·菌落PCR验证阳性克隆子 | 第54-55页 |
| ·表达载体质粒的提取与双酶切验证阳性克隆子 | 第55页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第55-56页 |
| ·Serpin蛋白的纯化结果 | 第56-57页 |
| ·Serpin糜蛋白酶和弹性蛋白酶的抑制活性检测 | 第57页 |
| ·Serpin促进双歧杆菌对HT-29细胞的粘附实验结果 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 参考文献(References) | 第59-61页 |
| 第四章 结论与建议 | 第61-63页 |
| ·结论 | 第61-62页 |
| ·双歧杆菌serpin基因的克隆和分析 | 第61页 |
| ·Serpin的表达与纯化 | 第61-62页 |
| ·Serpin的活性检测 | 第62页 |
| ·建议 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录A1 仪器设备 | 第64-65页 |
| 附录A2 试剂 | 第65-67页 |
| 附录B Serpin测序结果 | 第67-71页 |
| 个人介绍 | 第71页 |
| 已发表论文 | 第71页 |
| 待发表论文 | 第71页 |
