| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-42页 |
| 1.1 表观遗传学简介 | 第13-14页 |
| 1.2 核小体与染色质 | 第14-15页 |
| 1.3 组蛋白修饰 | 第15-17页 |
| 1.3.1 组蛋白的乙酰化修饰 | 第16-17页 |
| 1.3.2 组蛋白乙酰转移酶类型 | 第17页 |
| 1.4 组蛋白乙酰化修饰与基因转录调控 | 第17-18页 |
| 1.5 组蛋白乙酰转移酶GCN5简介 | 第18-19页 |
| 1.6 组蛋白乙酰转移酶GCN5的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.7 GCN5参与组装的复合体 | 第20-22页 |
| 1.8 GCN5与转录因子 | 第22-23页 |
| 1.9 转录因子简介 | 第23页 |
| 1.10 转录因子与基因表达调控 | 第23-24页 |
| 1.11 转录因子与细胞应激反应 | 第24-25页 |
| 1.12 活性氧自由基ROS简介 | 第25页 |
| 1.13 ROS的产生过程 | 第25-27页 |
| 1.14 ROS的种类 | 第27页 |
| 1.15 细胞内ROS的稳态平衡 | 第27-29页 |
| 1.15.1 氧化胁迫的产生 | 第27-28页 |
| 1.15.2 氧化胁迫与人类疾病及机体衰老 | 第28-29页 |
| 1.16 ROS稳态的重要作用 | 第29-33页 |
| 1.17 ROS清除系统 | 第33-36页 |
| 1.17.1 Catalase的发现 | 第34-35页 |
| 1.17.2 Catalase的重要功能 | 第35页 |
| 1.17.3 Catalase的催化机制 | 第35-36页 |
| 1.18 各个物种中的catalase | 第36-37页 |
| 1.18.1 植物中的catalase | 第36页 |
| 1.18.2 动物中的catalase | 第36-37页 |
| 1.18.3 真核微生物中的catalase | 第37页 |
| 1.19 抗氧化酶基因的表达调控 | 第37-39页 |
| 1.20 粗糙脉胞菌中的catalase的表达 | 第39-40页 |
| 1.20.1 粗糙脉胞菌 | 第39页 |
| 1.20.2 粗糙脉胞菌中的catalase组成及表达 | 第39页 |
| 1.20.3 CAT-3与菌株氧化拮抗 | 第39-40页 |
| 1.21 本论文的研究内容及问题 | 第40页 |
| 1.22 本课题的立体依据及研究意义 | 第40-42页 |
| 第二章 材料及方法 | 第42-60页 |
| 2.1 培养基 | 第42-43页 |
| 2.2 抗体 | 第43页 |
| 2.3 大肠杆菌菌株 | 第43页 |
| 2.4 载体构建 | 第43-44页 |
| 2.5 突变载体的构建 | 第44页 |
| 2.6 本课题相关质粒 | 第44-46页 |
| 2.7 可溶性GST融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第46页 |
| 2.8 多克隆抗体的制备 | 第46-47页 |
| 2.9 粗糙脉孢菌分生孢子的电穿孔遗传转化 | 第47-48页 |
| 2.10 本课题所用菌株及引物 | 第48-50页 |
| 2.11 斜面培养基菌丝表型检测 | 第50页 |
| 2.12 平板培养基菌丝表型检测 | 第50-51页 |
| 2.13 用race tube检测菌株的生长速度及H_2O_2抗性 | 第51页 |
| 2.14 粗糙脉孢菌可溶性蛋白的提取 | 第51页 |
| 2.15 Western免疫印迹 | 第51-52页 |
| 2.16 胶内分析法检测catalase活性 | 第52-53页 |
| 2.17 细胞外泌的catalase活性分析 | 第53-54页 |
| 2.18 蛋白质免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP) | 第54页 |
| 2.19 Northern | 第54-56页 |
| 2.20 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) | 第56-58页 |
| 2.21 Rreverse Transcription | 第58-60页 |
| 第三章 实验结果及分析讨论 | 第60-97页 |
| 3.1 乙酰转移酶GCN5参与粗糙脉孢菌cat-3基因表达的调控 | 第60-67页 |
| 3.1.1 筛选影响粗糙脉孢菌cat-3基因表达水平的组蛋白乙酰修饰酶突变体 | 第60-62页 |
| 3.1.2 gcn5基因缺失导致CAT-3表达水平显著降低 | 第62-63页 |
| 3.1.3 检测gcn5~(KO)突变体菌株分泌到细胞外的catalase活性 | 第63-64页 |
| 3.1.4 组蛋白乙酰转移酶突变体抗H_2O_2能力的检测 | 第64-65页 |
| 3.1.5 gcn5基因缺失导致CAT-3表达水平不再响应H_2O_2的诱导 | 第65-66页 |
| 3.1.6 gcn5基因缺失菌株表现出对H_2O_2刺激的敏感性 | 第66-67页 |
| 3.2 GCN5的乙酰转移酶活性对粗糙脉胞菌的生长和发育及CAT-3的表达是必需的 | 第67-72页 |
| 3.2.1 GCN5乙酰转移酶结构域分析及相关点突变构建 | 第67-69页 |
| 3.2.2 GCN5的组蛋白乙酰转移酶活性对于粗糙脉胞菌的生长及发育是必需的 | 第69-70页 |
| 3.2.3 GCN5的乙酰转移酶催化活性是调控cat-3基因表达的表达 | 第70-72页 |
| 3.2.4 GCN5乙酰转移酶突变体中的CAT-3的表达不再响应H_2O_2刺激 | 第72页 |
| 3.3 SAGA复合体中的HAT模块组分对于CAT-3的正常表达是必需的 | 第72-77页 |
| 3.3.1 粗糙脉孢菌SAGA复合体HAT模块组分 | 第72-73页 |
| 3.3.2 SAGA复合体的ADA2亚基缺失导致CAT-3的表达水平显著降低 | 第73-74页 |
| 3.3.3 HAT模块不同亚基影响菌丝的生长与发育程度不同 | 第74-75页 |
| 3.3.4 HAT模块不同亚基影响cat-3基因的表达程度不同 | 第75页 |
| 3.3.5 GCN5组装成SAGA复合体调控cat-3基因的表达 | 第75-77页 |
| 3.4 SAGA其他组分的缺失不同程度地影响了cat-3基因的表达 | 第77-79页 |
| 3.4.1 UBP模块的Sgf73和Ubp8亚基缺失也影响cat-3基因的表达 | 第77-78页 |
| 3.4.2 SPT模块组分亚基缺失突变体中cat-3基因的表达水平 | 第78页 |
| 3.4.3 TAF模块亚基参与cat-3基因表达调控 | 第78-79页 |
| 3.5 GCN5介导的cat-3基因区域的H3乙酰化对于基因的表达起到重要作用 | 第79-82页 |
| 3.5.1 GCN5缺失导致cat-3基因区域的组蛋白乙酰化修饰显著降低 | 第79-80页 |
| 3.5.2 构建组蛋白H3K14位点的点突变菌株 | 第80-81页 |
| 3.5.3 H3K14A和H3K14R点突变菌株中cat-3基因的表达显著下降 | 第81页 |
| 3.5.4 H3K14A点突变导致cat-3基因的表达不再响应H_2O_2诱导 | 第81-82页 |
| 3.7 cat-3基因的表达受到bZIP型转录因子CPC1的影响 | 第82-84页 |
| 3.8 CPC1/GCN4能够募集到cat-3基因的启动子区域 | 第84-87页 |
| 3.8.1 CPC1多克隆抗体的制备及检测 | 第84-85页 |
| 3.8.2 CPC1蛋白随H_2O_2刺激而增加 | 第85-86页 |
| 3.8.3 CPC1能够结合在cat-3基因的启动子区域 | 第86页 |
| 3.8.4 H_2O_2刺激增加CPC1在cat-3基因上的结合 | 第86-87页 |
| 3.9 CPC1是调控cat-3基因表达关键的转录因子 | 第87-90页 |
| 3.9.1 cpc-1与nap1~(KO)突变体中的CAT-3表达水平比较 | 第87-89页 |
| 3.9.2 cpc-1(j-5) nap1~(KO)双突变体中cat-3基因的表达不再响应H_2O_2刺激 | 第89-90页 |
| 3.10 CPC1募集GCN5到cat-3基因的启动子区域 | 第90-93页 |
| 3.10.1 CPC1突变导致cat-3基因区域的组蛋白乙酰化水平降低 | 第90-92页 |
| 3.10.2 粗糙脉孢菌中CPC1及GCN5调控cat-3基因表达的分子模型 | 第92-93页 |
| 3.11 讨论与小结 | 第93-97页 |
| 3.11.1 GCN5的乙酰转移酶活性对cat-3基因的表达起重要调控作用 | 第93-94页 |
| 3.11.2 GCN5与CPC1/GCN4调控cat-3基因表达的分子机制 | 第94-95页 |
| 3.11.3 NAP1并不是调控CAT-3表达的关键转录因子 | 第95页 |
| 3.11.4 CPC1可能氧化压力信号传导的效应蛋白 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 个人简历 | 第109页 |
