| 英文缩略词表 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第16-24页 |
| 第一章 牛支原体的分离、鉴定及耐药性鉴定 | 第24-33页 |
| 1.1 材料 | 第24-25页 |
| 1.1.1 载体、菌株和细胞 | 第24页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第25页 |
| 1.1.4 主要实验试剂的配制 | 第25页 |
| 1.2 方法 | 第25-28页 |
| 1.2.1 牛支原体的分离培养 | 第25页 |
| 1.2.2 分子生物学鉴定 | 第25-27页 |
| 1.2.3 抗菌药物敏感性实验 | 第27-28页 |
| 1.3 结果 | 第28-31页 |
| 1.3.1 牛支原体的分离培养 | 第28-29页 |
| 1.3.2 PCR检测结果 | 第29页 |
| 1.3.3 序列测定结果及序列同源性分析 | 第29-30页 |
| 1.3.4 药敏实验 | 第30-31页 |
| 1.4 讨论 | 第31-32页 |
| 1.5 小结 | 第32-33页 |
| 第二章 牛支原体间接ELISA检测方法的建立及应用 | 第33-49页 |
| 2.1 材料 | 第33-35页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第33页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第34页 |
| 2.1.4 主要实验试剂的配制 | 第34-35页 |
| 2.2 方法 | 第35-41页 |
| 2.2.1 P48基因优化与合成 | 第35页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第35页 |
| 2.2.3 目的基因的扩增及克隆 | 第35-37页 |
| 2.2.4 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.5 重组蛋白表达 | 第39-40页 |
| 2.2.6 重组蛋白的Westernblot分析 | 第40页 |
| 2.2.7 重组蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.8 间接ELISA检测方法的建立 | 第41页 |
| 2.2.9 间接ELISA检测方法性能评价 | 第41页 |
| 2.3 结果 | 第41-47页 |
| 2.3.1 目的基因片段的扩增结果 | 第41-42页 |
| 2.3.2 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| 2.3.3 重组蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第43页 |
| 2.3.4 IPTG浓度和诱导时间优化 | 第43-44页 |
| 2.3.5 目的蛋白的Westernblot鉴定 | 第44页 |
| 2.3.6 目的蛋白纯化 | 第44-45页 |
| 2.3.7 间接ELISA检测方法的建立 | 第45-46页 |
| 2.3.8 间接ELISA检测方法性能评价 | 第46-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-48页 |
| 2.5 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 牛支原体核酸检测荧光定量PCR方法的建立及评价 | 第49-57页 |
| 3.1 材料 | 第49-50页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第49-50页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第50页 |
| 3.2 方法 | 第50-52页 |
| 3.2.1 引物设计与合成 | 第50页 |
| 3.2.2 引物的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.3 标准曲线的绘制 | 第51页 |
| 3.2.4 Real-timePCR方法性能评价 | 第51-52页 |
| 3.3 结果 | 第52-55页 |
| 3.3.1 pMD18-T-P81质粒浓度的测定 | 第52页 |
| 3.3.2 标准曲线建立和Real-timePCR的灵敏性 | 第52-53页 |
| 3.3.3 Real-timePCR的准确性和重复性 | 第53-54页 |
| 3.3.4 Real-timePCR的特异性 | 第54-55页 |
| 3.3.5 Real-timePCR和常规PCR比较 | 第55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-56页 |
| 3.5 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 牛支原体LAMP核酸检测方法的建立与评价 | 第57-67页 |
| 4.1 材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第57页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 4.2 方法 | 第58-60页 |
| 4.2.1 基因组提取 | 第58页 |
| 4.2.2 pMD18-T-P81质粒标准品制备 | 第58页 |
| 4.2.3 引物设计 | 第58-59页 |
| 4.2.4 LAMP反应及反应条件优化 | 第59-60页 |
| 4.2.5 LAMP反应特异性 | 第60页 |
| 4.2.6 LAMP反应敏感性 | 第60页 |
| 4.2.7 LAMP组织样本检测 | 第60页 |
| 4.3 结果 | 第60-66页 |
| 4.3.1 LAMP反应产物分析 | 第60-61页 |
| 4.3.2 LAMP扩增条件优化 | 第61-64页 |
| 4.3.3 LAMP方法的特异性 | 第64页 |
| 4.3.4 LAMP 方法的敏感性 | 第64-65页 |
| 4.3.5 LAMP方法和常规PCR比较 | 第65页 |
| 4.3.6 临床样本检测 | 第65-66页 |
| 4.4 讨论 | 第66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 在学期间取得的学术成果 | 第76-78页 |
| 个人简历 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
