| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 综述 禽流感病毒及其检测方法研究现状 | 第12-22页 |
| 1 禽流感病毒的生物学特性 | 第12-16页 |
| 1.1 禽流感概述 | 第12页 |
| 1.2 禽流感病毒的结构 | 第12-13页 |
| 1.3 禽流感编码蛋白的功能 | 第13-16页 |
| 1.3.1 核蛋白NP | 第13页 |
| 1.3.2 血凝素蛋白HA | 第13-14页 |
| 1.3.3 神经氨酸酶NA | 第14-15页 |
| 1.3.4 基质蛋白MP | 第15页 |
| 1.3.5 聚合酶蛋白PB2、PB1、PA | 第15-16页 |
| 1.3.6 非结构蛋白NS | 第16页 |
| 1.4 禽流感病毒的理化特性 | 第16页 |
| 2 禽流感的流行情况 | 第16-18页 |
| 2.1 高致病性禽流感(HPAI)的流行情况 | 第16-17页 |
| 2.2 低致病性禽流感(LPAI)的流行情况 | 第17-18页 |
| 3 禽流感检测方法的研究进展 | 第18-21页 |
| 3.1 病原分离 | 第18页 |
| 3.2 免疫学诊断技术 | 第18-20页 |
| 3.2.1 血凝试验和血凝抑制试验 | 第18-19页 |
| 3.2.2 中和试验 | 第19页 |
| 3.2.3 琼脂扩散试验 | 第19页 |
| 3.2.4 神经氨酸酶抑制试验 | 第19页 |
| 3.2.5 免疫荧光技术 | 第19-20页 |
| 3.2.6 酶联免疫吸附试验 | 第20页 |
| 3.2.7 胶体金免疫层析法 | 第20页 |
| 3.3 分子生物学诊断技术 | 第20-21页 |
| 3.3.1 反转录一聚合酶链式反应 | 第20-21页 |
| 3.3.2 核酸探针技术 | 第21页 |
| 3.3.3 基因芯片技术 | 第21页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 研究内容一 抗禽流感病毒核蛋白NP的单克隆抗体的研制 | 第22-37页 |
| 1 试验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 病毒、细胞、血清、质粒 | 第22页 |
| 1.2 实验动物 | 第22-23页 |
| 1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| 1.5 试验仪器 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-31页 |
| 2.1 抗原的制备 | 第24页 |
| 2.2 动物免疫 | 第24页 |
| 2.3 小鼠多抗血清的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.4 融合 | 第25-28页 |
| 2.4.1 小鼠骨髓瘤细胞的制备 | 第25页 |
| 2.4.2 饲养细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.4.3 脾细胞的准备 | 第26页 |
| 2.4.4 细胞融合 | 第26-27页 |
| 2.4.5 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第27页 |
| 2.4.6 单抗针对流感病毒蛋白鉴定 | 第27页 |
| 2.4.7 阳性杂交瘤细胞的亚克隆筛选 | 第27-28页 |
| 2.5 杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第28页 |
| 2.6 腹水的制备 | 第28-29页 |
| 2.7 腹水亚类鉴定 | 第29页 |
| 2.8 腹水间接免疫荧光效价测定 | 第29页 |
| 2.9 单抗Western-blot反应性测定 | 第29-30页 |
| 2.9.1 样品的制备 | 第29页 |
| 2.9.2 蛋白电泳与免疫印迹 | 第29-30页 |
| 2.10 单抗免疫沉淀反应性 | 第30-31页 |
| 2.10.1 样品的制备 | 第30页 |
| 2.10.2 蛋白电泳与免疫印迹 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-36页 |
| 3.1 小鼠多抗血清鉴定结果 | 第31页 |
| 3.2 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第31-32页 |
| 3.3 单抗针对流感病毒蛋白鉴定 | 第32-33页 |
| 3.4 阳性杂交瘤细胞的亚克隆筛选 | 第33页 |
| 3.5 腹水亚类鉴定结果 | 第33页 |
| 3.6 单克隆抗体效价测定 | 第33-34页 |
| 3.7 单抗Western-blot反应性测定结果 | 第34-35页 |
| 3.8 单抗免疫沉淀反应性结果 | 第35-36页 |
| 4 小结与讨论 | 第36-37页 |
| 研究内容二 检测禽流感病毒双夹心ELISA方法的建立 | 第37-49页 |
| 1 试验材料 | 第37-38页 |
| 1.1 病毒、血清 | 第37页 |
| 1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第38页 |
| 1.4 试验仪器 | 第38页 |
| 2 试验方法 | 第38-41页 |
| 2.1 腹水的纯化 | 第38-39页 |
| 2.1.1 腹水稀释平衡 | 第38-39页 |
| 2.1.2 样品纯化 | 第39页 |
| 2.1.3 纯化后样品鉴定 | 第39页 |
| 2.2 酶标二抗的制备 | 第39-40页 |
| 2.3 双抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第40-41页 |
| 2.3.1 包被单抗及检测用单抗筛选 | 第40页 |
| 2.3.2 单抗最佳包被浓度和HRP标记单抗最佳稀释度的确定 | 第40页 |
| 2.3.3 最佳抗体稀释液的确定 | 第40-41页 |
| 2.3.4 双抗体夹心ELISA临界值的确定 | 第41页 |
| 2.4 ELISA特异性试验 | 第41页 |
| 2.5 ELISA灵敏度试验 | 第41页 |
| 2.6 临床样品的检测 | 第41页 |
| 3 试验结果 | 第41-47页 |
| 3.1 单抗腹水纯化 | 第41-42页 |
| 3.2 包被单抗及检测用单抗筛选 | 第42-43页 |
| 3.3 单抗最佳包被浓度和HRP标记单抗最佳稀释度的确定 | 第43页 |
| 3.4 最佳二抗稀释液的确定 | 第43-44页 |
| 3.5 双抗体夹心ELISA临界值的确定 | 第44页 |
| 3.6 特异性试验结果 | 第44-45页 |
| 3.7 灵敏度试验结果 | 第45-46页 |
| 3.8 临床样品的检测结果 | 第46-47页 |
| 4 小结与讨论 | 第47-49页 |
| 全文总结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
