| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第16-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-31页 |
| 1.1 蜱P36分子的研究背景 | 第17-23页 |
| 1.1.1 蜱的概述 | 第17页 |
| 1.1.2 蜱的免疫调节蛋白 | 第17-19页 |
| 1.1.3 蜱的免疫调节蛋白P36及其同源分子 | 第19-23页 |
| 1.2 蜱生殖产卵的研究 | 第23-30页 |
| 1.2.1 蜱的生殖发育过程的概述 | 第23-24页 |
| 1.2.2 卵黄生成作用影响蜱卵细胞成熟过程 | 第24-27页 |
| 1.2.3 其它成分对蜱生殖发育影响的研究 | 第27-28页 |
| 1.2.4 大数据分析在蜱生殖营养一体化研究中的应用 | 第28-30页 |
| 1.3 本研究的目的意义 | 第30-31页 |
| 第二章 蜱RH36的表达特征和对生殖影响的观察 | 第31-54页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 材料与方法 | 第31-36页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第31页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第31-35页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-43页 |
| 2.3.1 RH36抗原表位的预测 | 第36-37页 |
| 2.3.2 KLH偶联的RH36多肽制备抗体 | 第37页 |
| 2.3.3 ELISA检测抗体效价 | 第37-38页 |
| 2.3.4 镰形扇头蜱组织材料的cDNA合成 | 第38-40页 |
| 2.3.5 Real-timeqPCR检测RH36在镰形扇头蜱不同状态下的转录水平 | 第40页 |
| 2.3.6 WesternBlot检测RH36在镰形扇头蜱不同组织器官的蛋白水平 | 第40-41页 |
| 2.3.7 RH36基因dsRNA的合成及纯化 | 第41-42页 |
| 2.3.8 RNA干扰及其对蜱生殖影响的观察 | 第42-43页 |
| 2.4 实验结果 | 第43-52页 |
| 2.4.1 RH36序列分析及系统进化树的构建 | 第43-45页 |
| 2.4.2 RH36在镰形扇头蜱不同发育阶段和不同吸血时间的表达特征 | 第45-46页 |
| 2.4.3 RH36在镰形扇头蜱半饱血状态下不同组织器官的动态分布 | 第46-49页 |
| 2.4.4 RH36RNAi对镰形扇头蜱生殖产卵的影响 | 第49-52页 |
| 2.5 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 RH36与卵黄发生关系的研究 | 第54-80页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 材料与方法 | 第54-56页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第54-55页 |
| 3.2.2 实验试剂及其配置 | 第55-56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-64页 |
| 3.3.1 卵黄蛋白的纯化 | 第56-58页 |
| 3.3.2 卵黄蛋白的鉴定 | 第58-59页 |
| 3.3.3 卵黄蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第59-62页 |
| 3.3.4 克隆扩增卵黄蛋白基因RHVg1、RHVg2、RHVg3和RHVg4LPD结构域序列 | 第62-63页 |
| 3.3.5 免疫荧光 | 第63-64页 |
| 3.4 实验结果 | 第64-78页 |
| 3.4.1 卵黄蛋白的分离纯化及鉴定 | 第64-68页 |
| 3.4.2 卵黄蛋白性质的分析 | 第68页 |
| 3.4.3 卵黄蛋白单克隆抗体的筛选及制备 | 第68-70页 |
| 3.4.4 卵黄蛋白单抗检测卵黄蛋白原在不同吸血时间血淋巴、脂肪体和唾液腺中的动态分布 | 第70页 |
| 3.4.5 卵黄蛋白原RHVg1、RHVg2、RHVg3和RHVg4LPD结构域序列的克隆及序列分析 | 第70-74页 |
| 3.4.6 RT-qPCR和半定量PCR法检测卵黄蛋白原基因在不同发育阶段和不同吸血时间及半饱血状态下的脂肪体、中肠、唾液腺和卵巢中的转录水平 | 第74-76页 |
| 3.4.7 RH36基因沉默后对卵黄蛋白(原)基因转录的影响 | 第76-78页 |
| 3.5 讨论 | 第78-80页 |
| 第四章 RH36干扰后卵巢的蛋白质组学分析 | 第80-99页 |
| 4.1 引言 | 第80页 |
| 4.2 材料与方法 | 第80-81页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第80页 |
| 4.2.2 实验试剂及耗材 | 第80页 |
| 4.2.3 实验仪器和分析软件 | 第80-81页 |
| 4.3 实验方法 | 第81-83页 |
| 4.3.1 蛋白质样品的制备方法及BCA定量 | 第81页 |
| 4.3.2 SDS-PAGE电泳 | 第81页 |
| 4.3.3 FASP酶解 | 第81页 |
| 4.3.4 TMT标记 | 第81-82页 |
| 4.3.5 RP分级 | 第82页 |
| 4.3.6 质谱分析 | 第82页 |
| 4.3.7 数据分析 | 第82页 |
| 4.3.8 GeneOntology(GO)功能注释 | 第82页 |
| 4.3.9 KEGG信号通路注释 | 第82-83页 |
| 4.3.10 GO注释与KEGG注释的富集分析 | 第83页 |
| 4.3.11 蛋白质聚类分析(Clustering) | 第83页 |
| 4.4 实验结果 | 第83-97页 |
| 4.4.1 蛋白质样品浓度及蛋白电泳 | 第83-85页 |
| 4.4.2 差异蛋白及其蛋白质聚类分析 | 第85-89页 |
| 4.4.3 吸血第5d和饱血后第10d的差异蛋白GO功能注释及其富集分析 | 第89-92页 |
| 4.4.4 吸血第5d和饱血后第10d的差异蛋白KEGG通路及其富集分析 | 第92-97页 |
| 4.4.5 差异蛋白的验证 | 第97页 |
| 4.5 讨论 | 第97-99页 |
| 第五章 RH36通过热激蛋白70家族影响蜱生殖的研究 | 第99-115页 |
| 5.1 引言 | 第99页 |
| 5.2 材料与方法 | 第99-100页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第99页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第99-100页 |
| 5.2.3 试剂的制备 | 第100页 |
| 5.2.4 实验仪器 | 第100页 |
| 5.3 实验方法 | 第100-103页 |
| 5.3.1 PCR扩增HSP70家族基因序列 | 第100-102页 |
| 5.3.2 HSP70-5和HSC70基因序列分析 | 第102-103页 |
| 5.3.3 HSP70-5和HSC70基因dsRNA的合成 | 第103页 |
| 5.3.4 HSP70-5和HSC70基因RNAi实验 | 第103页 |
| 5.3.5 WesternBlot方法检测HSP70-5蛋白的表达分布及其对卵黄蛋白或者RH36的影响 | 第103页 |
| 5.4 实验结果 | 第103-113页 |
| 5.4.1 HSP70-5和HSC70基因的克隆及序列分析 | 第103-106页 |
| 5.4.2 RT-qPCR和半定量PCR法检测HSC70基因在不同吸血时间的唾液腺、脂肪体、卵巢和中肠中的转录水平 | 第106-107页 |
| 5.4.3 WesternBlot检测HSP70-5在不同吸血时间脂肪体、血淋巴、卵巢和唾液腺中的蛋白水平 | 第107-108页 |
| 5.4.4 RH36基因沉默后对HSP70-5基因的影响 | 第108-109页 |
| 5.4.5 HSP70-5和HSC70基因分别沉默后对蜱的生物学性状的观察 | 第109-111页 |
| 5.4.6 HSP70-5和HSC70基因分别沉默后对RH36和卵黄蛋白原的影响 | 第111-112页 |
| 5.4.7 HSP70-5和HSC70基因分别沉默后对其它基因转录水平的影响 | 第112-113页 |
| 5.5 讨论 | 第113-115页 |
| 第六章 RH36通过焦点黏连相关蛋白影响蜱生殖产卵研究 | 第115-123页 |
| 6.1 引言 | 第115页 |
| 6.2 材料与方法 | 第115-116页 |
| 6.2.1 实验动物 | 第115页 |
| 6.2.2 实验试剂 | 第115-116页 |
| 6.2.3 试剂的制备 | 第116页 |
| 6.3 实验方法 | 第116-118页 |
| 6.3.1 PCR克隆扩增焦点黏连相关基因序列 | 第116页 |
| 6.3.2 焦点黏连相关基因dsRNA的合成 | 第116-117页 |
| 6.3.3 焦点黏连途径相关蛋白RNAi实验 | 第117-118页 |
| 6.3.4 WesternBlot方法检测焦点黏连途径相关蛋白与卵黄蛋白的关系 | 第118页 |
| 6.4 实验结果 | 第118-122页 |
| 6.4.1 焦点黏连途径相关基因部分序列的PCR扩增 | 第118-119页 |
| 6.4.2 RH36基因沉默后对焦点黏连途径相关蛋白的影响 | 第119页 |
| 6.4.3 焦点黏连途径相关蛋白分别沉默之后对蜱生殖产卵的影响 | 第119-121页 |
| 6.4.4 焦点黏连途径相关蛋白分别沉默后对卵黄蛋白原基因转录的影响 | 第121-122页 |
| 6.5 讨论 | 第122-123页 |
| 第七章 RH36通过内吞途径影响生殖发育的研究 | 第123-133页 |
| 7.1 引言 | 第123页 |
| 7.2 材料与方法 | 第123-124页 |
| 7.2.1 实验动物 | 第123页 |
| 7.2.2 实验试剂 | 第123-124页 |
| 7.2.3 试剂的制备 | 第124页 |
| 7.3 实验方法 | 第124-127页 |
| 7.3.1 PCR克隆扩增内吞途径相关基因序列 | 第124-126页 |
| 7.3.2 内吞途径相关基因dsRNA的合成 | 第126-127页 |
| 7.3.3 内吞途径相关蛋白RNAi实验 | 第127页 |
| 7.4 实验结果 | 第127-131页 |
| 7.4.1 内吞途径相关基因部分序列的PCR扩增 | 第127-128页 |
| 7.4.2 RH36基因沉默后对内吞途径相关蛋白基因转录的影响 | 第128页 |
| 7.4.3 内吞途径相关基因分别沉默之后对蜱生殖发育的影响 | 第128-129页 |
| 7.4.4 VPS24、VPS37和VgR基因沉默对卵黄蛋白原RHVg基因、RH36基因和其他内吞途径相关基因转录的影响 | 第129-131页 |
| 7.5 讨论 | 第131-133页 |
| 第八章 全文总结 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-145页 |
| 附录 | 第145-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
| 作者简历 | 第160页 |
