| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-35页 |
| 1.1 淀粉的生物合成 | 第13-26页 |
| 1.1.1 淀粉的结构 | 第13-15页 |
| 1.1.2 淀粉的生物合成 | 第15-26页 |
| 1.2 有关淀粉生物合成的调控 | 第26-29页 |
| 1.2.1 淀粉合成的相关酶类的协同作用 | 第26-27页 |
| 1.2.2 相关基因表达的调控 | 第27页 |
| 1.2.3 其他基因的影响 | 第27-29页 |
| 1.3 丙酮酸激酶(PK)的研究近况 | 第29-33页 |
| 1.3.1 丙酮酸激酶在糖酵解途径中的作用 | 第29-31页 |
| 1.3.2 PKs的同工酶 | 第31页 |
| 1.3.3 PKs亚基组成 | 第31-32页 |
| 1.3.4 PKs的理化特性 | 第32页 |
| 1.3.5 PKs的相关调控 | 第32-33页 |
| 1.3.6 PKs家族 | 第33页 |
| 1.3.7 植物PKs的相关研究 | 第33页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第33-35页 |
| 第二章 水稻垩白突变体ospk2的表型鉴定 | 第35-51页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-40页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第35页 |
| 2.1.2 稻米产量性状的测定 | 第35-36页 |
| 2.1.3 测定水稻灌浆的动态过程中干物质积累量 | 第36页 |
| 2.1.4 扫描电镜观察成熟糙米的自然横断面 | 第36页 |
| 2.1.5 发芽试验 | 第36页 |
| 2.1.6 胚乳半薄切片的制备及淀粉颗粒的染色观察 | 第36-37页 |
| 2.1.7 扫描电镜观察提取的胚乳淀粉颗粒 | 第37页 |
| 2.1.8 动态胚乳的透射电镜观察 | 第37页 |
| 2.1.9 总淀粉含量的测定 | 第37-38页 |
| 2.1.10 直链淀粉含量的测定 | 第38页 |
| 2.1.11 总蛋白含量的测定 | 第38-39页 |
| 2.1.12 总脂肪含量的测定 | 第39页 |
| 2.1.13 胶稠度测定 | 第39页 |
| 2.1.14 RVA谱分析 | 第39-40页 |
| 2.1.15 测定米粉的支链淀粉结构(链长分布) | 第40页 |
| 2.1.16 米粉尿素膨胀特性的检测 | 第40页 |
| 2.2 结果与分析 | 第40-49页 |
| 2.2.1 ospk2突变体的表型鉴定 | 第40-44页 |
| 2.2.2 观察比较野生型ZH11与ospk2突变体的胚乳中复合淀粉颗粒 | 第44-46页 |
| 2.2.3 测定野生型ZH11与ospk2突变体的淀粉相关理化性质 | 第46-49页 |
| 2.3 小结 | 第49-51页 |
| 2.3.1 ospk2突变体胚乳出现明显缺陷 | 第49页 |
| 2.3.2 ospk2突变体的胚乳发育过程中复合淀粉颗粒的形成存在异常 | 第49页 |
| 2.3.3 收获一年的ospk2突变体种子的发芽率极显著降低 | 第49页 |
| 2.3.4 ospk2突变体胚乳中淀粉特性发生明显变化 | 第49-51页 |
| 第三章 OsPK2基因的图位克隆与功能互补 | 第51-67页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-58页 |
| 3.1.1 种植定位群体与挑选极端单株 | 第51页 |
| 3.1.2 叶片总DNA的提取方法(SDS法及DNA快提法) | 第51-52页 |
| 3.1.3 PCR扩增 | 第52-53页 |
| 3.1.4 8%PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)检测PCR产物 | 第53-54页 |
| 3.1.5 开发与筛选具有的多态性分子标记及基因定位 | 第54-55页 |
| 3.1.6 预测候选基因与测序 | 第55页 |
| 3.1.7 构建多种转基因的表达载体及转化农杆菌 | 第55-57页 |
| 3.1.8 转基因阳性植株的鉴定 | 第57页 |
| 3.1.9 转基因材料表型考察 | 第57-58页 |
| 3.2 结果与分析 | 第58-65页 |
| 3.2.1 ospk2突变体的遗传分析 | 第58页 |
| 3.2.2 OsPK2基因的图位克隆和候选基因分析 | 第58-60页 |
| 3.2.3 转基因材料分析 | 第60-65页 |
| 3.3 小结 | 第65-67页 |
| 3.3.1 OsPK2是影响稻米淀粉合成的新基因 | 第65页 |
| 3.3.2 OsPK2影响水稻胚乳中的复合淀粉颗粒的形态及存在 | 第65-67页 |
| 第四章 OsPK2的功能分析 | 第67-89页 |
| 4.1 材料与方法 | 第67-77页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第67页 |
| 4.1.2 进化树构建与氨基酸序列比对分析 | 第67页 |
| 4.1.3 提取RNA与消化 | 第67-69页 |
| 4.1.4 DNA第一链的合成 | 第69页 |
| 4.1.5 Real-timePCR | 第69-70页 |
| 4.1.6 GUS活性染色 | 第70页 |
| 4.1.7 快速提取胚乳蛋白及Westernblot检测 | 第70-71页 |
| 4.1.8 构建亚细胞定位载体及大提质粒 | 第71-72页 |
| 4.1.9 转化水稻原生质体 | 第72-74页 |
| 4.1.10 瞬时转化烟草表皮细胞 | 第74页 |
| 4.1.11 真核蛋白表达与纯化 | 第74页 |
| 4.1.12 组织蛋白的提取 | 第74-75页 |
| 4.1.13 PK活性的测定 | 第75页 |
| 4.1.14 丙酮酸含量测定 | 第75页 |
| 4.1.15 酵母双杂交 | 第75-77页 |
| 4.1.16 双分子荧光互补 | 第77页 |
| 4.2 结果与分析 | 第77-87页 |
| 4.2.1 OsPK2是一个高度保守的基因 | 第77-80页 |
| 4.2.2 OsPK2基因的组织表达模式分析 | 第80-82页 |
| 4.2.3 OsPK2的亚细胞定位分析 | 第82-83页 |
| 4.2.4 OsPK2具有PK活性 | 第83-84页 |
| 4.2.5 OsPK2能够与其他三个假定的PKp蛋白互作,形成复合体 | 第84-86页 |
| 4.2.6 OsPK2突变影响多种代谢相关基因的表达变化,导致代谢出现紊乱.. | 第86-87页 |
| 4.3 小结 | 第87-89页 |
| 4.3.1 OsPK2为组成型表达基因,定位在叶绿体中 | 第87页 |
| 4.3.2 OsPK2编码具有生物活性的PK | 第87-88页 |
| 4.3.3 OsPK2与其他假定的PK蛋白形成异源复合体 | 第88页 |
| 4.3.4 OsPK2基因突变引起多重代谢相关基因表达量的改变 | 第88-89页 |
| 第五章 全文结论与讨论 | 第89-96页 |
| 参考文献 | 第96-109页 |
| 附录 | 第109-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 作者简历 | 第119页 |
