| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词简表 | 第10-12页 |
| 目录 | 第12-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-40页 |
| 1.1 引言 | 第17页 |
| 1.2 关节软骨 | 第17-22页 |
| 1.2.1 关节软骨的结构与功能 | 第17-19页 |
| 1.2.2 软骨的生长与退化 | 第19-20页 |
| 1.2.3 软骨损伤类型与修复 | 第20-21页 |
| 1.2.4 软骨修复面临的问题 | 第21-22页 |
| 1.3 软骨组织工程 | 第22-32页 |
| 1.3.1 种子细胞 | 第23-26页 |
| 1.3.1.1 软骨细胞 | 第23-24页 |
| 1.3.1.2 干细胞 | 第24-26页 |
| 1.3.2 生物支架材料 | 第26-29页 |
| 1.3.2.1 固体多孔支架 | 第26-27页 |
| 1.3.2.2 纤维 | 第27页 |
| 1.3.2.3 水凝胶 | 第27-28页 |
| 1.3.2.4 微载体 | 第28-29页 |
| 1.3.3 生物活性因子 | 第29-32页 |
| 1.3.3.1 生长因子 | 第29-31页 |
| 1.3.3.2 外界刺激 | 第31-32页 |
| 1.4 成软骨分化的影响因素 | 第32-35页 |
| 1.4.1 材料的成分对成软骨的影响 | 第32-33页 |
| 1.4.2 材料的结构对成软骨的影响 | 第33-34页 |
| 1.4.3 材料的机械性能对成软骨的影响 | 第34-35页 |
| 1.5 软骨修复发展趋势 | 第35-36页 |
| 1.6 本论文的研究目的、意义及主要内容 | 第36-40页 |
| 第二章 软骨细胞的提取及鉴定 | 第40-57页 |
| 2.1 引言 | 第40-41页 |
| 2.2 材料与方法 | 第41-48页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 2.2.2 实验设备 | 第42页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第42-48页 |
| 2.2.3.1 猪关节软骨细胞的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.3.2 软骨细胞的培养及传代 | 第43页 |
| 2.2.3.3 CCK-8 法绘制生长曲线 | 第43页 |
| 2.2.3.4 软骨细胞形态观察 | 第43-44页 |
| 2.2.3.5 RT-PCR 分析 mRNA 水平变化 | 第44-46页 |
| 2.2.3.6 免疫组化观察 | 第46页 |
| 2.2.3.7 组织染色 | 第46-47页 |
| 2.2.3.8 免疫印迹分析蛋白表达 | 第47-48页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第48-55页 |
| 2.3.1 软骨细胞形态变化 | 第48-50页 |
| 2.3.2 软骨细胞的生长曲线 | 第50页 |
| 2.3.3 软骨细胞体外培养的基因表达 | 第50-51页 |
| 2.3.4 组织切片染色分析 | 第51-53页 |
| 2.3.5 Ⅱ 型胶原免疫组化分析 | 第53-54页 |
| 2.3.6 Ⅱ 型胶原与糖胺聚糖蛋白的表达分析 | 第54-55页 |
| 2.4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第三章 微孔海藻酸钠水凝胶的制备及其对软骨细胞生长的影响 | 第57-78页 |
| 3.1 引言 | 第57-59页 |
| 3.2 材料与方法 | 第59-65页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第59-60页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第60页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第60-65页 |
| 3.2.3.1 明胶微球的制备 | 第60-61页 |
| 3.2.3.2 微孔水凝胶体系的建立 | 第61-62页 |
| 3.2.3.3 软骨细胞的培养 | 第62页 |
| 3.2.3.4 扫描电子显微镜 | 第62页 |
| 3.2.3.5 细胞增殖 | 第62-63页 |
| 3.2.3.6 mRNA 转录水平的定时定量分析 | 第63页 |
| 3.2.3.7 活死染色 | 第63-64页 |
| 3.2.3.8 蛋白表达水平分析 | 第64页 |
| 3.2.3.9 数据处理与分析 | 第64-65页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第65-77页 |
| 3.3.1 不同尺寸的明胶微球形貌 | 第65-66页 |
| 3.3.2 微孔水凝胶形成时间及溶胀性能 | 第66-67页 |
| 3.3.3 微孔海藻酸钠水凝胶内部结构 | 第67-69页 |
| 3.3.4 软骨细胞的增殖 | 第69-70页 |
| 3.3.5 明胶微球溶出时间及软骨细胞活性 | 第70-73页 |
| 3.3.6 RT-PCR 检测软骨基因的表达 | 第73-75页 |
| 3.3.7 Western blotting 检测特异蛋白表达 | 第75-77页 |
| 3.4 本章小结 | 第77-78页 |
| 第四章 微孔水凝胶对去分化软骨细胞再分化的影响 | 第78-98页 |
| 4.1 引言 | 第78-79页 |
| 4.2 材料与方法 | 第79-86页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第79-80页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第80-81页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第81页 |
| 4.2.3.1 去分化软骨细胞的培养及传代 | 第81页 |
| 4.2.3.2 微孔水凝胶包埋去分化软骨细胞体系的建立 | 第81页 |
| 4.2.4 测试与表征 | 第81-86页 |
| 4.2.4.1 扫描电镜 | 第81-82页 |
| 4.2.4.2 活死染色 | 第82页 |
| 4.2.4.3 糖胺聚糖定量表达检测 | 第82页 |
| 4.2.4.4 RT-PCR 检测基因表达 | 第82-83页 |
| 4.2.4.5 Westernblot 检测蛋白表达 | 第83-84页 |
| 4.2.4.6 组织染色 | 第84-85页 |
| 4.2.4.7 免疫组化分析 | 第85页 |
| 4.2.4.8 数据处理与分析 | 第85-86页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第86-96页 |
| 4.3.1 去分化软骨细胞培养体系的建立 | 第86-87页 |
| 4.3.2 去分化软骨细胞的再分化基因表达检测 | 第87-89页 |
| 4.3.3 GAG 定量分析 | 第89-90页 |
| 4.3.4 组织切片与染色分析 | 第90-93页 |
| 4.3.5 Ⅰ 型与 Ⅱ 型胶原免疫组化分析 | 第93-95页 |
| 4.3.6 Westernblot 分析 | 第95-96页 |
| 4.4 本章小结 | 第96-98页 |
| 第五章 RGD 修饰的微孔水凝胶对 ATDC5 细胞成软骨分化的影响 | 第98-118页 |
| 5.1 引言 | 第98-99页 |
| 5.2 材料与方法 | 第99-105页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第99-100页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第100-101页 |
| 5.2.3 实验方法 | 第101-105页 |
| 5.2.3.1 RGD 修饰微孔海藻酸钠水凝胶 | 第101-102页 |
| 5.2.3.2 ATDC5 细胞的培养 | 第102页 |
| 5.2.3.3 扫描电镜 | 第102页 |
| 5.2.3.4 全氨基酸分析 | 第102-103页 |
| 5.2.3.5 核磁共振分析 | 第103页 |
| 5.2.3.6 细胞增殖 | 第103页 |
| 5.2.3.7 组织学观察 | 第103页 |
| 5.2.3.8 基因与蛋白分析 | 第103-104页 |
| 5.2.3.9 数据处理与分析 | 第104-105页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第105-117页 |
| 5.3.1 RGD 改性海藻酸钠水凝胶的机理 | 第105页 |
| 5.3.2 ATDC5 细胞形貌 | 第105-106页 |
| 5.3.3 RGD 修饰的微孔海藻酸钠水凝胶形貌分析 | 第106-107页 |
| 5.3.4 核磁共振分析 | 第107-108页 |
| 5.3.5 全氨基酸分析 | 第108-109页 |
| 5.3.6 ATDC5 细胞增殖 | 第109-110页 |
| 5.3.7 成软骨分化基因表达分析 | 第110-113页 |
| 5.3.8 组织切片与染色分析 | 第113-115页 |
| 5.3.9 Westernblot 分析细胞外基质蛋白表达 | 第115-117页 |
| 5.4 本章小结 | 第117-118页 |
| 全文总结与展望 | 第118-121页 |
| 本论文的创新性 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-137页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 附件 | 第140页 |
