苦荞过敏原TBa的定点突变及免疫活性研究
| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 过敏原概述 | 第13-16页 |
| ·过敏原的定义 | 第13页 |
| ·过敏原的临床免疫特征 | 第13-14页 |
| ·主要过敏原的特征 | 第14页 |
| ·过敏性的决定因素 | 第14-15页 |
| ·交叉反应 | 第15页 |
| ·线性表位和构象表位 | 第15-16页 |
| 2 过敏原的分类 | 第16-21页 |
| ·按照来源分类 | 第16-17页 |
| ·按照结构和序列同源性分类 | 第17-21页 |
| 3 荞麦过敏研究进展 | 第21-23页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 苦荞过敏原TBa的定点突变 | 第24-31页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·菌种及质粒 | 第24页 |
| ·试剂及工具酶 | 第24-25页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-26页 |
| ·过敏原TBa结构保守区域分析 | 第25页 |
| ·TBa序列的同源性比对 | 第25-26页 |
| ·TBa蛋白的二级结构分析 | 第26页 |
| ·E1表位区段的定点突变 | 第26页 |
| ·突变体重组表达载体的构建 | 第26页 |
| 3 结果 | 第26-29页 |
| ·过敏原TBa保守区域分析 | 第26-27页 |
| ·TBa序列的同源性比对及二级结构预测 | 第27-28页 |
| ·E1表位区段的定点突变 | 第28-29页 |
| ·突变体重组表达载体的构建 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 TBa突变体蛋白的表达,纯化及鉴定 | 第31-38页 |
| 1 材料 | 第31-32页 |
| ·菌株及载体 | 第31页 |
| ·试剂及工具酶 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-34页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第32页 |
| ·Ni~(2+)-NTA亲和层析 | 第32-33页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第33页 |
| ·Western blot检测 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-37页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第34页 |
| ·目的蛋白的电泳分析 | 第34-36页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第36页 |
| ·表达产物的Western blot鉴定 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 TBa突变体蛋白的免疫活性鉴定 | 第38-44页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| ·实验仪器和设备 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38-39页 |
| 2 方法 | 第39页 |
| ·样品制备 | 第39页 |
| ·间接性ELISA | 第39页 |
| ·点杂交 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-42页 |
| ·过敏原TBa各表位区段的ELISA检测 | 第39-40页 |
| ·过敏原TBa各表位区段的点杂交检测 | 第40-41页 |
| ·E1及其各突变体蛋白的ELISA检测 | 第41-42页 |
| ·E1及其各突变体蛋白的点杂交检测 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-54页 |
