| 英文缩写 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 第一部分 老年血清在MSCs衰老及其功能方面的作用 | 第17-28页 |
| 1 实验动物 | 第17页 |
| 2 仪器和试剂 | 第17-19页 |
| 3 实验方法 | 第19-21页 |
| ·年轻和老年大鼠血清的制备 | 第19页 |
| ·MSCs的分离与培养 | 第19页 |
| ·细胞衰老检测 | 第19-20页 |
| ·SA-β-半乳糖苷酶染色 | 第19页 |
| ·细胞内活性氧检测 | 第19-20页 |
| ·细胞增殖检测 | 第20页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第20页 |
| ·AO/EB染色 | 第20页 |
| ·Hoechest 33342染色 | 第20页 |
| ·统计学分析 | 第20-21页 |
| 4 结果 | 第21-25页 |
| ·老年血清对MSCs衰老的影响 | 第21-22页 |
| ·老年血清对MSCs增殖的影响 | 第22-23页 |
| ·老年血清对MSCs存活的影响 | 第23-25页 |
| 5 讨论 | 第25-28页 |
| 第二部分 老年血清对Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第28-45页 |
| 1 实验动物 | 第28页 |
| 2 仪器和试剂 | 第28-30页 |
| 3 实验方法 | 第30-36页 |
| ·年轻和老年血清中Wnt 3a含量检测 | 第30-31页 |
| ·β-catenin和GSK-3β表达检测 | 第31-34页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第31-32页 |
| ·Western blotting检测 | 第32-34页 |
| ·c-myc表达检测 | 第34-36页 |
| ·统计学分析 | 第36页 |
| 4 结果 | 第36-42页 |
| ·年轻和老年血清中Wnt 3a含量 | 第36-37页 |
| ·老年血清对β-catenin表达的影响 | 第37-39页 |
| ·老年血清对GSK-3β表达的影响 | 第39-41页 |
| ·老年血清对c-myc mRNA表达的影响 | 第41-42页 |
| 5 讨论 | 第42-45页 |
| 第三部分 Wnt/β-catenin信号通路对MSCs衰老的作用及其机制 | 第45-73页 |
| 1 实验动物 | 第45页 |
| 2 仪器和试剂 | 第45-48页 |
| 3 实验方法 | 第48-53页 |
| ·si-β-catenin的制备和检测 | 第48-50页 |
| ·si-β-catenin转染效率检测 | 第49页 |
| ·si-β-catenin有效抑制片段筛选 | 第49-50页 |
| ·si-β-catenin最佳转染抑制时间确定 | 第50页 |
| ·细胞衰老检测 | 第50-51页 |
| ·SA-β-半乳糖苷酶染色 | 第50-51页 |
| ·细胞内活性氧检测 | 第51页 |
| ·细胞增殖检测 | 第51页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第51页 |
| ·AO/EB染色 | 第51页 |
| ·Hoechest 33342染色 | 第51页 |
| ·γ-H2A.X和p53蛋白表达检测 | 第51-52页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第51-52页 |
| ·Western blotting检测 | 第52页 |
| ·p16~(INK4a)、p53和p21 mRNA表达检测 | 第52-53页 |
| ·统计学分析 | 第53页 |
| 4 结果 | 第53-69页 |
| ·si-β-catenin转染效率及有效片段筛选 | 第53-58页 |
| ·si-β-catenin转染效率 | 第53-54页 |
| ·si-β-catenin有效片段确定 | 第54-57页 |
| ·si-β-catenin最佳转染抑制时间 | 第57-58页 |
| ·Wnt/β-catenin信号通路对细胞衰老及其功能的影响 | 第58-63页 |
| ·Wnt/β-catenin信号通路对MSCs衰老的影响 | 第58-61页 |
| ·Wnt/β-catenin信号通路对MSCs增殖的影响 | 第61页 |
| ·Wnt/β-catenin信号通路对MSCs存活的影响 | 第61-63页 |
| ·Wnt/β-catenin信号通路影响细胞衰老的作用机制 | 第63-69页 |
| ·Wnt/β-catenin信号通路激活与DNA损伤反应 | 第63-66页 |
| ·Wnt/β-catenin信号通路对p53/p21途径的调控作用 | 第66-69页 |
| 5 讨论 | 第69-73页 |
| 全文小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 综述 | 第82-93页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 附录 | 第94-95页 |
