| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-32页 |
| 1.1 前言 | 第13-14页 |
| 1.2 MIM蛋白介绍及其研究进展 | 第14-21页 |
| 1.2.1 MIM蛋白结构及功能 | 第14-18页 |
| 1.2.1.1 BAR家族是重要的膜调控蛋白 | 第14-16页 |
| 1.2.1.2 MIM是重要的细胞骨架调控蛋白 | 第16-17页 |
| 1.2.1.3 MIM参与多种信号通路调控 | 第17-18页 |
| 1.2.2 MIM医药领域开发及前景 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 MIM生理功能、在肿瘤发生迁移中的作用 | 第18页 |
| 1.2.2.2 靶向多肽序列抑制MIM与RPTP的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.2.2.3 针对MIM RNAi的相关研究 | 第19页 |
| 1.2.3 I-BAR区域是重要的功能结构 | 第19-21页 |
| 1.2.3.1 MIM蛋白塑造磷脂膜需依赖I-BAR结构域 | 第19-20页 |
| 1.2.3.2 靶向MIM I-BAR功能的相关研究 | 第20-21页 |
| 1.3 亲和层析柱简介 | 第21-26页 |
| 1.3.1 亲和层析分离技术原理 | 第21-22页 |
| 1.3.2 亲和层析的类型 | 第22-24页 |
| 1.3.2.1 免疫亲和色谱 | 第22-23页 |
| 1.3.2.2 固定化金属离子亲和层析 | 第23-24页 |
| 1.3.2.3 拟生物亲和色谱 | 第24页 |
| 1.3.3 亲和层析色谱的反应机理 | 第24-25页 |
| 1.3.4 亲和层析色谱的基本操作过程及其注意事项 | 第25-26页 |
| 1.3.4.1 亲和层析装柱、上样以及洗脱 | 第25-26页 |
| 1.3.4.2 流速对分离效果的影响 | 第26页 |
| 1.3.4.3 亲和层析柱的贮存 | 第26页 |
| 1.4 原子力显微镜介绍及其在蛋白形态观察中的应用 | 第26-32页 |
| 1.4.1 原子力显微镜的起源与发展 | 第26-27页 |
| 1.4.2 原子力显微镜的工作原理 | 第27-29页 |
| 1.4.3 原子力显微镜的操作模式 | 第29-30页 |
| 1.4.4 原子力显微镜在蛋白形态观察中的应用 | 第30-32页 |
| 1.4.4.1 分析蛋白质的大小和体积 | 第30页 |
| 1.4.4.2 观察蛋白质结构和功能 | 第30-31页 |
| 1.4.4.3 研究蛋白质与其他生物大分子相互作用 | 第31-32页 |
| 第二章 采用NI-NTA纯化HIS-TAG MIM-I-BAR蛋白 | 第32-49页 |
| 2.1 前言 | 第32页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第32-37页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第32-34页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第34页 |
| 2.2.3 试剂的配制 | 第34-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-43页 |
| 2.3.1 His-tag MIM-I-BAR蛋白的体外表达 | 第37-38页 |
| 2.3.2 Western Blot鉴定蛋白表达 | 第38-39页 |
| 2.3.3 蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.4 Bradford法测定总蛋白含量 | 第40-41页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE | 第41页 |
| 2.3.6 最佳纯化条件探究 | 第41-42页 |
| 2.3.7 脱盐与超滤 | 第42-43页 |
| 2.4 结果与分析 | 第43-48页 |
| 2.4.1 蛋白表达情况检测 | 第43-44页 |
| 2.4.2 裂解条件优化探索 | 第44-45页 |
| 2.4.3 洗脱梯度优化探究 | 第45-47页 |
| 2.4.4 蛋白纯度和浓度检测 | 第47-48页 |
| 2.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 HIS-TAG MIM-I-BAR纯化优化 | 第49-58页 |
| 3.1 前言 | 第49页 |
| 3.2 试剂与仪器 | 第49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-51页 |
| 3.3.1 原子力显微镜成像 | 第49-50页 |
| 3.3.2 动力学分子模拟 | 第50-51页 |
| 3.4 结果与分析 | 第51-56页 |
| 3.4.1 AFM观测Ni-NTA纯化前后变化 | 第51-52页 |
| 3.4.2 分子模拟探究蛋白与咪唑之间影响 | 第52-53页 |
| 3.4.3 脱盐柱纯化前后变化 | 第53-54页 |
| 3.4.4 超滤前后变化 | 第54-55页 |
| 3.4.5 SDS-PAGE检测与AFM检测效果对比 | 第55-56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第四章 HIS TAG MIM-I-BAR的形貌观测和质谱检测 | 第58-66页 |
| 4.1 前言 | 第58页 |
| 4.2 试剂与仪器 | 第58-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-60页 |
| 4.3.1 质谱检测及数据库比对 | 第59-60页 |
| 4.3.2 原子力显微镜观测蛋白形貌 | 第60页 |
| 4.4 结果与分析 | 第60-65页 |
| 4.4.1 蛋白的质谱检测结果 | 第61-63页 |
| 4.4.2 蛋白的形貌观测 | 第63-65页 |
| 4.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第五章 总结与展望 | 第66-68页 |
| 5.1 结论 | 第66页 |
| 5.2 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 硕士期间成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
