| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1.前言 | 第12-25页 |
| 1.1 植物花青素生物合成分子机制研究进展 | 第12-22页 |
| 1.1.1 植物花青素生物合成途径 | 第12-14页 |
| 1.1.2 调控植物花青素生物合成的转录因子 | 第14-16页 |
| 1.1.3 影响植物花青素合成的环境因素 | 第16-17页 |
| 1.1.4 miRNAs对植物花青素合成的调控作用 | 第17-22页 |
| 1.2 桑树花青素生物合成分子机制研究进展 | 第22-23页 |
| 1.2.1 桑树花青素生物合成途径 | 第22-23页 |
| 1.2.2 桑树花青素生物合成的调控基因 | 第23页 |
| 1.3 研究的目的意义 | 第23-25页 |
| 2.材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第25页 |
| 2.1.3 试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-40页 |
| 2.2.1 桑椹花青素定性和定量分析 | 第27-28页 |
| 2.2.2 桑椹RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.3 小RNA文库的构建及Solexa测序 | 第28-29页 |
| 2.2.4 Solexa测序分析 | 第29-30页 |
| 2.2.5 miRNAs表达的差异性验证 | 第30-31页 |
| 2.2.6 基因的克隆及序列分析 | 第31-33页 |
| 2.2.7 基因植物表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.8 转基因拟南芥的获得 | 第35-36页 |
| 2.2.9 转基因拟南芥筛选和鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.10 拟南芥的杂交和杂交苗的鉴定 | 第37页 |
| 2.2.11 转基因拟南芥荧光定量PCR | 第37-38页 |
| 2.2.12 拟南芥植株花青素含量测定 | 第38页 |
| 2.2.13 启动子序列扩增及信息学分析 | 第38页 |
| 2.2.14 启动子植物表达载体构建及农杆菌转化 | 第38页 |
| 2.2.15 烟草和桑树幼苗处理 | 第38页 |
| 2.2.16 启动子的诱导表达特性 | 第38-40页 |
| 3.结果与分析 | 第40-85页 |
| 3.1 不同发育时期桑椹中花青素的定性和定量分析 | 第40-41页 |
| 3.1.1 桑椹中花青素含量的测定 | 第40页 |
| 3.1.2 桑椹花青素HPLC检测 | 第40-41页 |
| 3.2 桑椹miRNAs的表达谱分析 | 第41-57页 |
| 3.2.1 桑椹小分子RNA测序文库构建和高通量测序 | 第41-42页 |
| 3.2.2 桑椹保守miRNAs的鉴定与新miRNAs的预测 | 第42-45页 |
| 3.2.3 桑椹miRNAs碱基偏好性分析 | 第45-46页 |
| 3.2.4 miRNAs差异表达分析 | 第46-49页 |
| 3.2.5 miRNAs表达差异性验证 | 第49-50页 |
| 3.2.6 差异表达miRNAs的靶基因预测 | 第50-57页 |
| 3.3 mul-miR159a对花青素合成的调控作用分析 | 第57-67页 |
| 3.3.1 Mul-MIR159a基因的克隆及序列分析 | 第57-58页 |
| 3.3.2 Mul-MIR159a基因植物表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 3.3.3 转Mul-MIR159a基因拟南芥的获得及鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3.4 mul-miR159a对拟南芥MYB33基因的靶向作用分析 | 第60-61页 |
| 3.3.5 Mul-MYB33基因对花青素合成的调控作用分析 | 第61-67页 |
| 3.4 Mul-MIR159a和Mul-MYB33基因表达特性的初步分析 | 第67-73页 |
| 3.4.1 Mul-MIR159a和Mul-MYB33基因启动子的克隆 | 第67页 |
| 3.4.2 pMulMIR159a和pMulMYB33植物表达载体的构建 | 第67-68页 |
| 3.4.3 pMulMIR159a和pMulMYB33启动子的生物信息学分析 | 第68-71页 |
| 3.4.4 pMulMIR159a和pMulMYB33的诱导表达活性分析 | 第71-72页 |
| 3.4.5 Mul-MIR159a基因和Mul-MYB33基因的诱导表达特性分析 | 第72-73页 |
| 3.5 mul-miR477对花青素合成的调控作用分析 | 第73-85页 |
| 3.5.1 Mul-MIR477和Mul-ABCB19-AS基因的克隆及序列分析 | 第73-74页 |
| 3.5.2 Mul-MIR477和Mul-ABCB19-AS基因植物表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 3.5.3 转Mul-MIR477基因和转Mul-ABCB19-AS基因拟南芥的获得 | 第75-76页 |
| 3.5.4 mul-miR477对Mul-ABCB19-AS基因的靶向作用分析 | 第76-77页 |
| 3.5.5 Mul-ABCB19基因在花青素合成过程中的作用分析 | 第77-82页 |
| 3.5.6 Mul-ABCB19-AS对Mul-ABCB19基因的表达抑制作用分析 | 第82-83页 |
| 3.5.7 MulABCB19-AS和Mul-ABCB19基因杂交植株的花青素含量测定 | 第83-85页 |
| 4.讨论 | 第85-89页 |
| 4.1 mul-miR159a对桑椹花青素合成的调控作用 | 第85-86页 |
| 4.2 mul-miR477对桑椹花青素合成的调控作用 | 第86-87页 |
| 4.3 miRNAs介导的桑椹花青素合成机制 | 第87-89页 |
| 5.结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及成果 | 第100页 |
