| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-12页 |
| Abstract | 第12-17页 |
| 第一部分 DHFR/TYMS抑制剂协同替莫唑胺治疗胶质瘤的作用及机制研究 | 第21-54页 |
| 1.1 引言 | 第21-24页 |
| 1.2 实验材料与仪器 | 第24-28页 |
| 1.2.1 细胞株和原代样本 | 第24页 |
| 1.2.2 实验动物 | 第24页 |
| 1.2.3 药物 | 第24页 |
| 1.2.4 试剂 | 第24-26页 |
| 1.2.5 相关试剂的配置 | 第26-27页 |
| 1.2.6 实验仪器 | 第27-28页 |
| 1.3 实验方法 | 第28-34页 |
| 1.3.1 细胞培养 | 第28页 |
| 1.3.2 SRB染色法测定肿瘤细胞的增殖活性 | 第28页 |
| 1.3.3 siRNA技术沉默人胶质瘤细胞U87/U251中的TYMS和DHFR | 第28-29页 |
| 1.3.4 DAPI染色检测细胞凋亡 | 第29页 |
| 1.3.5 Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡 | 第29页 |
| 1.3.6 Western blot检测蛋白表达情况 | 第29-30页 |
| 1.3.7 质粒转染技术 | 第30-31页 |
| 1.3.8 Real-time PCR测定细胞相关基因表达水平的变化 | 第31页 |
| 1.3.9 BrdU掺入及免疫荧光 | 第31-32页 |
| 1.3.10 免疫组化(石蜡切片) | 第32页 |
| 1.3.11 人胶质瘤细胞U251裸小鼠移植瘤模型建立及实验 | 第32-33页 |
| 1.3.12 TUNEL法检测细胞凋亡 | 第33页 |
| 1.3.13 数据分析 | 第33-34页 |
| 1.4 实验结果 | 第34-51页 |
| 1.4.1 DHFR/TYMS高表达于胶质瘤细胞和患者肿瘤组织 | 第34-37页 |
| 1.4.2 DHFR/TYMS促进胶质瘤细胞的增值 | 第37-42页 |
| 1.4.3 抑制DHFR/TYMS促进TMZ对U251和U87细胞的增殖抑制作用 | 第42-47页 |
| 1.4.4 PTX协同TMZ激活AMPK-mTOR信号通路 | 第47-51页 |
| 1.5 讨论 | 第51-54页 |
| 第二部分 TYMS抑制剂5-FU导致的神经毒性及机制研究 | 第54-86页 |
| 2.1 引言 | 第54-56页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第56-61页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第56页 |
| 2.2.2 细胞株和实验动物 | 第56-57页 |
| 2.2.3 药物与试剂 | 第57-59页 |
| 2.2.4 Western blot实验相关试剂的配制 | 第59-60页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第60-61页 |
| 2.3 实验方法 | 第61-65页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第61页 |
| 2.3.2 OPC的纯化和分化 | 第61页 |
| 2.3.3 组织和细胞免疫荧光 | 第61页 |
| 2.3.4 组织免疫组化(冰冻切片) | 第61-62页 |
| 2.3.5 Real-Time PCR | 第62页 |
| 2.3.6 透射电镜和g-ratio分析 | 第62-63页 |
| 2.3.7 Western blot | 第63-64页 |
| 2.3.8 质粒转染 | 第64页 |
| 2.3.9 荧光素酶报告基因 | 第64页 |
| 2.3.10 数据分析 | 第64-65页 |
| 2.4 实验结果 | 第65-83页 |
| 2.4.1 5-FU引起少突胶质细胞损伤 | 第65-66页 |
| 2.4.2 5-FU引起中枢神经系统脱髓鞘现象 | 第66-68页 |
| 2.4.3 5-FU不影响少突胶质细胞的分化 | 第68页 |
| 2.4.4 5-FU明显减少少突胶质前体细胞的表达 | 第68-69页 |
| 2.4.5 5-FU不引起少突胶质细胞的增殖变化 | 第69-70页 |
| 2.4.6 5-FU引起少突胶质细胞的凋亡 | 第70-71页 |
| 2.4.7 5-FU抑制转录因子TCF7L2的表达 | 第71-73页 |
| 2.4.8 5-FU干扰TCF7L2/HDAC1/2复合物的形成 | 第73-75页 |
| 2.4.9 成年小鼠中的脱髓鞘再生现象 | 第75-77页 |
| 2.4.10 幼年小鼠中5-FU引起的中枢神经系统脱髓鞘再生现象 | 第77-79页 |
| 2.4.11 TCF7L2在损伤后修复过程中被激活 | 第79-80页 |
| 2.4.12 TCF7L2促进少突胶质细胞的增值和分化 | 第80-83页 |
| 2.5 讨论 | 第83-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 综述 DHFR和TYMS抑制剂的研究进展 | 第96-119页 |
| 参考文献 | 第109-119页 |
| 作者简介及在读期间取得的科研成果 | 第119页 |
