| 目录 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| 1 伏马毒素概述 | 第11-20页 |
| 1.1 伏马毒素FB的污染情况 | 第11-12页 |
| 1.2 伏马毒素的理化性质及毒性机理 | 第12-13页 |
| 1.3 FB毒代动力学 | 第13-14页 |
| 1.4 伏马毒素的毒性作用 | 第14-19页 |
| 1.4.1 急性和亚急性毒性作用 | 第14-15页 |
| 1.4.2 亚慢性毒性作用 | 第15-16页 |
| 1.4.3 慢性毒性作用和致癌性 | 第16-17页 |
| 1.4.4 基因毒性 | 第17页 |
| 1.4.5 细胞毒性 | 第17-18页 |
| 1.4.6 生殖毒性和发育毒性作用 | 第18页 |
| 1.4.7 对神经系统的影响 | 第18页 |
| 1.4.8 对心血管体统的影响 | 第18-19页 |
| 1.5 对人类的影响 | 第19-20页 |
| 2 伏马毒素的限量标准 | 第20页 |
| 3 伏马毒素的检测方法 | 第20-25页 |
| 3.1 样品的采集 | 第20页 |
| 3.2 提取净化与富集 | 第20-21页 |
| 3.3 检测方法 | 第21-25页 |
| 3.3.1 气相色谱法 | 第21-22页 |
| 3.3.2 液相色谱法 | 第22-23页 |
| 3.3.2.1 衍生剂的选择 | 第22-23页 |
| 3.3.2.2 流动相的选择 | 第23页 |
| 3.3.3 薄层色谱法 | 第23-24页 |
| 3.3.4 液相色谱-质谱联用技术 | 第24页 |
| 3.3.5 酶联免疫方法 | 第24-25页 |
| 3.3.6 其他方法 | 第25页 |
| 4 本研究目的及意义 | 第25-27页 |
| 第二章 伏马毒素FB_1人工抗原的制备 | 第27-31页 |
| 1 材料与方法 | 第27-28页 |
| 1.1 试剂 | 第27页 |
| 1.2 仪器设备 | 第27页 |
| 1.3 人工抗原合成 | 第27-28页 |
| 1.3.1 FB_1与载体匙孔鏚血蓝蛋白KLH的偶联 | 第27-28页 |
| 1.3.2 包被抗原的合成 | 第28页 |
| 1.4 人工抗原的鉴定 | 第28页 |
| 1.4.1 紫外扫描鉴定 | 第28页 |
| 1.4.2 免疫学方法鉴定 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-29页 |
| 2.1 完全抗原的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.1.1 紫外扫描鉴定 | 第28-29页 |
| 2.1.2 免疫学方法鉴定 | 第29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 抗FB_1单克隆抗体的制备 | 第31-49页 |
| 1 材料与方法 | 第31-34页 |
| 1.1 试剂 | 第31页 |
| 1.2 仪器与耗材 | 第31页 |
| 1.3 实验动物及生物材料 | 第31-32页 |
| 1.4 主要溶液系统 | 第32-34页 |
| 1.4.1 细胞培养液 | 第32页 |
| 1.4.2 ELISA相关试剂 | 第32-33页 |
| 1.4.3 SDS-PAGE蛋白电泳工作液 | 第33-34页 |
| 1.4.4 其它溶液 | 第34页 |
| 2 单克隆抗体的制备流程 | 第34-41页 |
| 2.1 小鼠的免疫 | 第34页 |
| 2.2 抗FB_1杂交瘤细胞株的建立 | 第34-39页 |
| 2.2.1 饲养细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.2 小鼠骨髓瘤细胞的准备 | 第35页 |
| 2.2.3 免疫脾细胞的制备 | 第35页 |
| 2.2.4 细胞融合 | 第35-36页 |
| 2.2.5 阳性克隆的筛选 | 第36页 |
| 2.2.6 杂交瘤细胞的克隆化 | 第36-38页 |
| 2.2.6.1 iELISA操作程序的建立 | 第37页 |
| 2.2.6.2 CiELISA操作程序的建立 | 第37-38页 |
| 2.2.6.3 封闭条件的摸索 | 第38页 |
| 2.2.6.4 确定包被抗原的工作浓度和抗体效价 | 第38页 |
| 2.2.7 杂交瘤细胞的冻存与扩大培养 | 第38-39页 |
| 2.3 单克隆抗体的大量产生 | 第39-41页 |
| 2.3.1 腹水的纯化 | 第39页 |
| 2.3.2 抗原抗体工作浓度的确定 | 第39页 |
| 2.3.3 CiELISA法相关参数的测定和计算 | 第39-40页 |
| 2.3.4 MAb特异性鉴定 | 第40页 |
| 2.3.5 MAb亚类鉴定 | 第40页 |
| 2.3.6 MAb分子量测定 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-46页 |
| 3.1 封闭条件的摸索 | 第41页 |
| 3.2 BALB/C小鼠免疫效果 | 第41-42页 |
| 3.2.1 抗血清的效价检测 | 第42页 |
| 3.2.2 融合前小鼠效价检测 | 第42页 |
| 3.3 包被抗原工作浓度及阳性血清效价的确定 | 第42-43页 |
| 3.4 杂交瘤细胞的建立 | 第43-44页 |
| 3.4.1 细胞融合的结果 | 第43页 |
| 3.4.2 杂交瘤细胞的筛选结果 | 第43页 |
| 3.4.3 单克隆抗体细胞株的建立及稳定性 | 第43-44页 |
| 3.5 腹水的制备 | 第44页 |
| 3.6 MAb的性质鉴定 | 第44-46页 |
| 3.6.1 腹水蛋白分子量 | 第44页 |
| 3.6.2 抗原抗体最佳工作浓度 | 第44页 |
| 3.6.3 CiELISA标准工作曲线及相关参数 | 第44-45页 |
| 3.6.4 MAb特异性鉴定 | 第45-46页 |
| 3.6.5 MAb类型及亚类鉴定 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 FB1间接竞争ELISA检测方法的建立 | 第49-57页 |
| 1 材料与方法 | 第49-51页 |
| 1.1 试剂 | 第49页 |
| 1.2 仪器与器材 | 第49页 |
| 1.3 ELISA检测方法的建立 | 第49-51页 |
| 1.3.1 样品处理方法 | 第49页 |
| 1.3.2 测定方法 | 第49-50页 |
| 1.3.3 样品基质(提取液甲醇)干扰检测 | 第50页 |
| 1.3.4 标准曲线的建立 | 第50页 |
| 1.3.5 添加回收实验 | 第50-51页 |
| 1.4 HPLC-MS/MS法测定FB_1 | 第51页 |
| 1.4.1 色谱条件 | 第51页 |
| 1.4.2 标准曲线的制作 | 第51页 |
| 1.5 ELISA法与HPLC-MS/MS方法验证 | 第51页 |
| 2 结果 | 第51-55页 |
| 2.1 样品基质干扰 | 第51-52页 |
| 2.2 添加回收率及重复性 | 第52-53页 |
| 2.3 HPLC-MS/MS方法检测FB1 | 第53-54页 |
| 2.3.1 色谱及质谱条件的优化 | 第53页 |
| 2.3.2 FB_1的ESI-MS/MS和特征离子峰 | 第53-54页 |
| 2.3.3 标准曲线的制作及线性关系 | 第54页 |
| 2.4 与HPLC-MS/MS方法比较验证 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 攻读学位期间发表的发表的论文目录 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
