| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 研究背景 | 第9-26页 |
| 1.1 卵子发生与卵泡发育 | 第9-14页 |
| 1.1.1 出生前卵子发生 | 第9页 |
| 1.1.2 卵泡发育 | 第9-10页 |
| 1.1.3 出生后的卵子发生与雌性生殖干细胞 | 第10-12页 |
| 1.1.4 生殖干细胞相关标志物 | 第12-14页 |
| 1.2 精子发生与精原干细胞 | 第14-15页 |
| 1.2.1 精原干细胞 | 第14页 |
| 1.2.2 精原干细胞的起源 | 第14-15页 |
| 1.2.3 精子发生 | 第15页 |
| 1.3 精原干细胞的移植 | 第15-20页 |
| 1.3.1 受体动物的准备 | 第17-18页 |
| 1.3.2 精原干细胞的移植方法 | 第18页 |
| 1.3.3 精原干细胞移植的应用前景 | 第18-20页 |
| 1.4 MicroRNA | 第20-26页 |
| 1.4.1 microRNA 的生成和作用机制 | 第20-22页 |
| 1.4.2 microRNA 与生殖 | 第22页 |
| 1.4.3 microRNA 相关实验技术 | 第22-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-52页 |
| 2.1 实验仪器与试剂 | 第26页 |
| 2.2 实验动物 | 第26页 |
| 2.3 实验试剂的配制 | 第26-30页 |
| 2.3.1 细胞培养用试剂的配制 | 第26-30页 |
| 2.4 STO 细胞的培养 | 第30-32页 |
| 2.4.1 STO 细胞的传代 | 第30页 |
| 2.4.2 STO 细胞的换液 | 第30-31页 |
| 2.4.3 STO 细胞的冻存 | 第31页 |
| 2.4.4 STO 细胞饲养层的处理 | 第31-32页 |
| 2.5 雌性生殖干细胞（FGSC）的培养 | 第32-34页 |
| 2.5.1 FGSC 细胞的传代 | 第32-33页 |
| 2.5.2 FGSC 细胞的换液 | 第33页 |
| 2.5.3 FGSC 细胞的冻存 | 第33-34页 |
| 2.6 逆转录PCR（RT-RCR） | 第34-40页 |
| 2.6.1 细胞总RNA 的提取 | 第34-35页 |
| 2.6.2 卵巢组织RNA 的提取 | 第35-36页 |
| 2.6.3 反转录（RT） | 第36-39页 |
| 2.6.4 1%琼脂糖凝胶电泳 | 第39-40页 |
| 2.7 培养细胞的免疫荧光检测 | 第40-41页 |
| 2.8 TRAP 法检测培养细胞的端粒酶活性 | 第41页 |
| 2.9 雌性生殖干细胞的移植 | 第41页 |
| 2.10 小鼠卵巢组织学 | 第41-42页 |
| 2.10.1 小鼠卵巢组织石蜡包埋 | 第41-42页 |
| 2.10.2 小鼠卵巢组织化学 | 第42页 |
| 2.11 小鼠卵巢组织免疫荧光 | 第42-43页 |
| 2.12 PCR 筛选后代GFP 转基因小鼠 | 第43-45页 |
| 2.12.1 小鼠尾巴中提取基因组DNA | 第43-44页 |
| 2.12.2 PCR 方法检测小鼠GFP 基因的表达 | 第44-45页 |
| 2.13 Southern blot 检测后代GFP 转基因小鼠 | 第45-51页 |
| 2.13.1 从小鼠尾提取基因组总DNA | 第45页 |
| 2.13.2 基因组DNA 样品处理 | 第45-46页 |
| 2.13.3 琼脂糖凝胶电泳分离基因组酶切片段 | 第46页 |
| 2.13.4 毛细管法转膜印记与DNA 交联 | 第46-47页 |
| 2.13.5 探针制备与回收 | 第47-49页 |
| 2.13.6 用Gene Images~(TM) AlkPhos Direct~(TM) labelling and detection system 试剂盒标记探针 | 第49页 |
| 2.13.7 预杂交和杂交 | 第49-50页 |
| 2.13.8 封阻与洗膜 | 第50页 |
| 2.13.9 显色、曝光与显影 | 第50-51页 |
| 2.14 microRNA 差异表达谱的检测 | 第51-52页 |
| 第三章 实验结果 | 第52-71页 |
| 3.1 雌性生殖干细胞体外长期培养状态 | 第52-53页 |
| 3.2 雌性生殖干细胞相关标志物的检测 | 第53-58页 |
| 3.2.1 RT-PCR 检测Oct4 的表达 | 第53-54页 |
| 3.2.2 细胞免疫荧光检测Fragilis 的表达 | 第54-55页 |
| 3.2.3 RT-PCR 检测分化标志物的表达 | 第55-57页 |
| 3.2.4 TRAP 法检测端粒酶活性 | 第57-58页 |
| 3.3 雌性生殖干细胞的手术移植 | 第58-61页 |
| 3.3.1 受体母鼠卵巢组织学检测 | 第58-59页 |
| 3.3.2 受体母鼠卵巢组织GFP 免疫荧光检测 | 第59页 |
| 3.3.3 转基因后代的筛选 | 第59-61页 |
| 3.4 小鼠雌性生殖干细胞与卵巢microRNA 差异表达谱 | 第61-71页 |
| 第四章 结果讨论总结与展望 | 第71-76页 |
| 4.1 结果讨论 | 第71-73页 |
| 4.1.1 雌性生殖干细胞体外长期培养体系 | 第71-72页 |
| 4.1.2 雌性生殖干细胞的移植 | 第72-73页 |
| 4.1.3 雌性生殖干细胞与microRNA | 第73页 |
| 4.2 总结 | 第73-74页 |
| 4.3 展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 附录 | 第84-93页 |
| 附录Ⅰ实验仪器 | 第84-87页 |
| 附录Ⅱ材料与试剂 | 第87-89页 |
| 附录Ⅲ实验试剂的配制方法 | 第89-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的文章 | 第94-96页 |
