| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 7-ACA与D-7-ACA性质与用途 | 第10-11页 |
| 1.1.1 头孢类抗生素 | 第10-11页 |
| 1.1.2 头孢类抗生素的合成路线 | 第11页 |
| 1.2 工业酶的应用与发展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 工业酶的开发 | 第11-13页 |
| 1.2.2 工业酶的应用领域 | 第13页 |
| 1.3 头孢菌素脱乙酰酶 | 第13-15页 |
| 1.3.1 头孢菌素脱乙酰酶来源 | 第13页 |
| 1.3.2 头孢菌素脱乙酰酶的研究应用 | 第13-15页 |
| 1.4 重组大肠杆菌表达 | 第15-17页 |
| 1.4.1 重组大肠杆菌表达系统 | 第15-16页 |
| 1.4.2 重组大肠杆菌发酵研究 | 第16-17页 |
| 1.5 固定化酶 | 第17-19页 |
| 1.5.1 固定化酶的发展 | 第17页 |
| 1.5.2 固定化酶方法 | 第17-19页 |
| 1.6 本课题研究意义与主要内容 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料与分析方法 | 第20-29页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第20-23页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 仪器设备与耗材 | 第20-21页 |
| 2.1.3 药品与试剂 | 第21-23页 |
| 2.2 培养基与缓冲液 | 第23-24页 |
| 2.2.1 培养基 | 第23-24页 |
| 2.2.2 溶液与缓冲液 | 第24页 |
| 2.3 实验与分析方法 | 第24-29页 |
| 2.3.1 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第24-25页 |
| 2.3.2 Bradford法测定蛋白浓度 | 第25-27页 |
| 2.3.3 HPLC法测定7-ACA与D-7-ACA含量 | 第27-28页 |
| 2.3.4 酶活定义 | 第28-29页 |
| 第三章 表达头孢菌素脱乙酰酶的工程菌构建 | 第29-38页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-31页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第29页 |
| 3.2.2 菌体培养 | 第29页 |
| 3.2.3 基因组与质粒抽提 | 第29-30页 |
| 3.2.4 PCR扩增 | 第30页 |
| 3.2.5 质粒构建 | 第30-31页 |
| 3.2.6 重组蛋白表达与检测 | 第31页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第31-36页 |
| 3.3.1 重组菌BL21-pET-CAH构建与表达 | 第31-32页 |
| 3.3.2 重组菌DH5α-pCAH构建与表达 | 第32-36页 |
| 3.4 本章小结 | 第36-38页 |
| 第四章 重组大肠杆菌DH5α-pCAH发酵及重组CAH分离纯化 | 第38-44页 |
| 4.1 引言 | 第38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-40页 |
| 4.2.1 7L罐发酵DH5α-pCAH | 第38-39页 |
| 4.2.2 粗酶液的制备 | 第39页 |
| 4.2.3 CAH纯化与浓缩 | 第39-40页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第40-43页 |
| 4.3.1 重组大肠杆菌DH5α-pCAH的发酵培养 | 第40-41页 |
| 4.3.2 重组CAH的分离纯化 | 第41-43页 |
| 4.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 4.4.1 重组大肠杆菌的发酵 | 第43页 |
| 4.4.2 重组CAH的分离纯化 | 第43-44页 |
| 第五章 头孢菌素脱乙酰酶的固定化 | 第44-50页 |
| 5.1 引言 | 第44-45页 |
| 5.2 实验方法 | 第45页 |
| 5.2.1 载体预处理 | 第45页 |
| 5.2.2 缓冲液的配置 | 第45页 |
| 5.2.3 固定化操作 | 第45页 |
| 5.2.4 固定化后处理 | 第45页 |
| 5.2.5 固定化酶活性测定 | 第45页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第45-49页 |
| 5.3.1 缓冲液离子强度对固定化的影响 | 第45-46页 |
| 5.3.2 缓冲液pH对固定化的影响 | 第46-47页 |
| 5.3.3 不同温度对固定化影响 | 第47页 |
| 5.3.4 反应时间对固定化的影响 | 第47-48页 |
| 5.3.5 投酶量对固定化酶的影响 | 第48-49页 |
| 5.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第六章 固定化酶性质研究 | 第50-56页 |
| 6.1 引言 | 第50页 |
| 6.2 实验方法 | 第50页 |
| 6.2.1 固定化酶制备方法 | 第50页 |
| 6.2.2 缓冲液制备 | 第50页 |
| 6.2.3 测活体系 | 第50页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第50-55页 |
| 6.3.1 最适反应温度 | 第50-51页 |
| 6.3.2 最适反应pH | 第51-52页 |
| 6.3.3 温度稳定性 | 第52-53页 |
| 6.3.4 pH稳定性 | 第53-54页 |
| 6.3.5 固定化酶重复使用稳定性 | 第54-55页 |
| 6.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第七章 总结与展望 | 第56-58页 |
| 7.1 总结 | 第56页 |
| 7.2 讨论与展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
