| 致谢 | 第6-7页 |
| 英文缩写词表 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 目录 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-40页 |
| 1.1 顺式环氧琥珀酸水解酶 | 第14-17页 |
| 1.1.1 CESH酶产生菌 | 第14-15页 |
| 1.1.2 酶学性质和催化机制研究 | 第15-17页 |
| 1.2 环氧化物水解酶 | 第17-27页 |
| 1.2.1 环氧化物水解酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.2 柠檬油-1,2-环氧化物水解酶(LEH) | 第18-19页 |
| 1.2.3 α/β水解酶折叠的环氧化物水解酶 | 第19-22页 |
| 1.2.4 白三烯A4水解酶(1eukotriene A4 hydrolase,LTA4) | 第22-24页 |
| 1.2.5 哺乳动物的可溶性环氧化物水解酶(mammalian soluble epoxide hydrolase,sEH) | 第24-26页 |
| 1.2.6 哺乳动物的微粒体环氧化物水解酶(mammalian microsomal epoxide hydrolase,mEH) | 第26页 |
| 1.2.7 其它环氧化物水解酶 | 第26-27页 |
| 1.3 分子对接 | 第27-32页 |
| 1.3.1 分子对接理论基础 | 第27-28页 |
| 1.3.2 分子对接常用方法 | 第28-30页 |
| 1.3.3 分子对接软件 | 第30页 |
| 1.3.4 AutoDock以及AutoDock Tools(ADT) | 第30-32页 |
| 1.4 立项依据及内容 | 第32-33页 |
| 1.5 技术路线 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-40页 |
| 第二章 Bordetella sp.BK-52顺式环氧琥珀酸水解酶的同源建模和分子对接 | 第40-72页 |
| 2.1 引言 | 第40-41页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第41-48页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第41页 |
| 2.2.2 主要试剂和商品来源 | 第41页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第41页 |
| 2.2.4 基因组DNA提取 | 第41-42页 |
| 2.2.5 CESH基因的获得 | 第42-43页 |
| 2.2.6 基因工程菌构建 | 第43-46页 |
| 2.2.7 蛋白纯化 | 第46页 |
| 2.2.8 酶活测定 | 第46页 |
| 2.2.9 蛋白浓度测定 | 第46-47页 |
| 2.2.10 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第47页 |
| 2.2.11 酶活性中心离子检测 | 第47页 |
| 2.2.12 多序列比对和同源建模 | 第47-48页 |
| 2.2.13 分子对接 | 第48页 |
| 2.3 实验结果 | 第48-65页 |
| 2.3.1 CESH酶序列比对和二级结构预测 | 第48-50页 |
| 2.3.2 CESH酶基因工程菌构建 | 第50-55页 |
| 2.3.3 CESH酶的表达和纯化 | 第55页 |
| 2.3.4 活性中心金属离子分析 | 第55-56页 |
| 2.3.5 CESH酶的同源建模 | 第56-59页 |
| 2.3.6 分子对接 | 第59-65页 |
| 2.4 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 第三章 Bordetella sp.BK-52顺式环氧琥珀酸水解酶的催化机制研究 | 第72-94页 |
| 3.1 引言 | 第72-73页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第73-78页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第73页 |
| 3.2.2 主要试剂和商品来源 | 第73-74页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第74页 |
| 3.2.4 定点突变 | 第74-77页 |
| 3.2.5 蛋白纯化 | 第77页 |
| 3.2.6 酶活测定 | 第77页 |
| 3.2.7 蛋白浓度测定 | 第77页 |
| 3.2.8 动力学参数测定 | 第77页 |
| 3.2.9 对映体过量值(enantiomeric excess,EE) | 第77页 |
| 3.2.10 圆二色谱(circular dichroism,CD) | 第77-78页 |
| 3.2.11 同位素标记实验 | 第78页 |
| 3.2.12 电感耦合等离子质谱(inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)测定 | 第78页 |
| 3.3 实验结果 | 第78-86页 |
| 3.3.1 突变体的构建和表达 | 第78-81页 |
| 3.3.2 酶学性质研究 | 第81-85页 |
| 3.3.3 H_2~(18)O同位素示踪实验 | 第85-86页 |
| 3.4 讨论 | 第86-92页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 第四章 结论与展望 | 第94-96页 |
| 4.1 结论 | 第94页 |
| 4.2 创新点 | 第94页 |
| 4.3 展望 | 第94-96页 |
| 作者简介 | 第96-97页 |
