| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 BAR 结构域超家族 | 第12-13页 |
| 1.2 BAR 结构域蛋白与细胞骨架 | 第13-14页 |
| 1.3 BAR 结构域蛋白与 GTPases | 第14页 |
| 1.4 BAR 结构域蛋白与细胞结构 | 第14-19页 |
| 1.5 BAR 结构域蛋白参与的膜塑形过程的机制 | 第19-23页 |
| 1.6 BAR 结构域蛋白与 Rab 蛋白 | 第23-25页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-48页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第27-29页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.2 菌株与细胞系 | 第28页 |
| 2.2.3 载体 | 第28页 |
| 2.2.4 基因 | 第28-29页 |
| 2.2.5 实验所用引物 | 第29页 |
| 2.3 试剂和溶液配制 | 第29-32页 |
| 2.3.1 培养基配制 | 第29页 |
| 2.3.2 常用溶液配制 | 第29-32页 |
| 2.4 实验方法及步骤 | 第32-48页 |
| 2.4.1 PCR 引物设计 | 第32页 |
| 2.4.2 PCR 反应 | 第32-33页 |
| 2.4.3 限制性内切酶对片段和载体进行酶切及 DNA 连接反应 | 第33-35页 |
| 2.4.4 DNA 凝胶电泳 | 第35页 |
| 2.4.5 DNA 回收 | 第35-36页 |
| 2.4.6 质粒抽提 | 第36-37页 |
| 2.4.7 大肠杆菌感受态细胞 | 第37页 |
| 2.4.8 原核表达检测 | 第37-38页 |
| 2.4.9 蛋白质大规模原核表达 | 第38页 |
| 2.4.10 蛋白质亲和层析纯化（重力柱） | 第38-39页 |
| 2.4.11 蛋白质分子筛层析纯化 | 第39-40页 |
| 2.4.12 蛋白质浓度测定（Bradford 法） | 第40-41页 |
| 2.4.13 蛋白质浓缩 | 第41页 |
| 2.4.14 测序 | 第41页 |
| 2.4.15 贴壁型哺乳动物细胞培养 | 第41-42页 |
| 2.4.16 外源基因导入真核细胞表达 | 第42-43页 |
| 2.4.17 细胞收集及破碎 | 第43页 |
| 2.4.18 His-pulldown | 第43-44页 |
| 2.4.19 Western blot | 第44-45页 |
| 2.4.20 蛋白质结晶及结构解析 | 第45-46页 |
| 2.4.21 蛋白质序列生物信息学分析 | 第46-48页 |
| 第三章 实验结果 | 第48-71页 |
| 3.1 srGAP2 F-BAR domain 蛋白质序列的生物信息学分析 | 第48-55页 |
| 3.1.1 srGAP2 F-BAR domain 蛋白质序列比对分析 | 第48-49页 |
| 3.1.2 srGAP2 F-BAR domain 蛋白质序列的折叠倾向预测 | 第49-51页 |
| 3.1.3 使用 Psipred Prediction 软件对 srGAP2 F-BAR domain 蛋白质进行二级结构预测 | 第51-55页 |
| 3.2 srGAP2 F-BAR domain 蛋白质的原核表达、纯化 | 第55-65页 |
| 3.2.1 原核表达载体构建 | 第55-56页 |
| 3.2.2 srrGP2 F-BAR domain 蛋白的原核表达与纯化 | 第56-65页 |
| 3.3 真核蛋白 Rab4，5，7，8，11 的表达 | 第65页 |
| 3.4 Rab4，5，7，8，11; GFP-N1 与 F-BAR-1-357 及 F-BAR-1-480 pulldown | 第65-66页 |
| 3.5 srGAP2 F-BAR domain 蛋白质的结晶与结构解析 | 第66-71页 |
| 3.5.1 srGAP2 F-BAR domain 蛋白质结晶条件的初筛 | 第66-67页 |
| 3.5.2 srGAP2 F-BAR-15-347 蛋白质晶体优化 | 第67-69页 |
| 3.5.3 srGAP2 F-BAR-15-347 蛋白质晶体 X 射线衍射和结构解析 | 第69-71页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第79页 |
