| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-31页 |
| 1.1 大环内酯类抗生素的作用与危害 | 第15-20页 |
| 1.1.1 大环内酯类抗生素 | 第15-16页 |
| 1.1.2 大环内酯类抗生素抗性作用机理 | 第16-17页 |
| 1.1.3 大环内酯类抗生素的使用现状 | 第17页 |
| 1.1.4 动物性食品中大环内酯类抗生素残留来源及危害 | 第17-18页 |
| 1.1.5 我国及其他国家对大环内酯类抗生素的监管 | 第18-20页 |
| 1.2 大环内酯类抗生素残留检测方法 | 第20-24页 |
| 1.2.1 生物学方法 | 第20-22页 |
| 1.2.2 薄层色谱法 | 第22页 |
| 1.2.3 毛细管电泳法 | 第22-23页 |
| 1.2.4 气相色谱-质谱联用 | 第23页 |
| 1.2.5 高效液相色谱法（HPLC） | 第23页 |
| 1.2.6 液相色谱-质谱联用法 | 第23-24页 |
| 1.3 大环内酯类物质调控蛋白介绍 | 第24-29页 |
| 1.3.1 四环素转录调控蛋白家族 | 第24-27页 |
| 1.3.2 大环内酯类物质调控蛋白MphR（A）和MphR（E） | 第27-29页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 1.5 研究技术路线 | 第30-31页 |
| 第二章 MphR(A)和MphR(E)蛋白表达质粒构建 | 第31-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第32页 |
| 2.1.2 主要设备 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.2.1 表达蛋白的基因序列选择及设计 | 第32-33页 |
| 2.2.2 p ET-MAV 和 p ET-MEV 的构建（p ET-MAV 和 p ET-MEV 的构建方法完全相同） | 第33-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-37页 |
| 2.3.1 含mphR(A)-VP16-His6基因重组质粒测序结果 | 第35-36页 |
| 2.3.2 含mphR(E)-VP16-His6基因重组质粒测序结果 | 第36-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 MphR(A)和MphR(E)蛋白表达及鉴定 | 第38-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.2 主要设备 | 第38页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第38-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 蛋白表达菌株构建 | 第39-40页 |
| 3.2.2 MphR(A)和MphR(E)蛋白表达 | 第40页 |
| 3.2.3 蛋白纯化 | 第40-41页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE电泳鉴定表达蛋白 | 第41页 |
| 3.2.5 蛋白活性评价 | 第41页 |
| 3.2.6 蛋白浓度测定 | 第41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-44页 |
| 3.3.1 MphR(A)融合蛋白SDS-PAGE结果 | 第41-42页 |
| 3.3.2 MphR(E)融合蛋白SDS-PAGE结果 | 第42-43页 |
| 3.3.3 MphR(A)融合蛋白活性测试结果 | 第43-44页 |
| 3.3.4 MphR(E)融合蛋白活性测试结果 | 第44页 |
| 3.3.5 纯化蛋白浓度测定 | 第44页 |
| 3.4 结果分析 | 第44-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-47页 |
| 第四章 类ELISA检测系统的构建优化及两种蛋白的比较 | 第47-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第47页 |
| 4.1.2 主要设备 | 第47-48页 |
| 4.1.3 溶液配制 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 类ELISA方法建立 | 第48-49页 |
| 4.2.2 类ELISA系统参数优化 | 第49页 |
| 4.2.3 MphR(A)蛋白和MphR(E)蛋白系统抗生素识别谱比较 | 第49-50页 |
| 4.2.4 MphR(A)蛋白和MphR(E)蛋白启动子DNA结合特性 | 第50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-59页 |
| 4.3.1 蛋白稀释液及其他缓冲液（稀释液） | 第50-52页 |
| 4.3.2 蛋白和红霉素是否预先反应的影响 | 第52-54页 |
| 4.3.3 MphR(A)建立的类ELISA系统红霉素标准曲线 | 第54页 |
| 4.3.4 MphR(A)和MphR(E)蛋白系统对大环内酯类抗生素识别性能比较 | 第54-57页 |
| 4.3.5 MphR(A)和MphR(E)蛋白与DNA的结合 | 第57-58页 |
| 4.3.6 DNA对系统灵敏度的影响 | 第58-59页 |
| 4.4 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 DNA对MphR(A)蛋白体外检测系统性能影响研究 | 第60-67页 |
| 5.1 实验材料 | 第60-62页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第60页 |
| 5.1.2 主要设备 | 第60页 |
| 5.1.3 溶液配制 | 第60-62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62页 |
| 5.2.1 类ELISA实验流程 | 第62页 |
| 5.2.2 使用生物膜干涉技术测定MphR(A)蛋白和DNA亲和力 | 第62页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第62-66页 |
| 5.3.1 MphR(A)蛋白与不同DNA序列的作用 | 第62-64页 |
| 5.3.2 BLI测定MphR(A)和DNA结合力 | 第64-66页 |
| 5.4 小结 | 第66-67页 |
| 第六章 MphR(A)蛋白系统用于牛奶中红霉素检测的初步构建 | 第67-73页 |
| 6.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 6.1.1 主要试剂 | 第68页 |
| 6.1.2 主要设备 | 第68页 |
| 6.1.3 溶液配制 | 第68-69页 |
| 6.2 实验方法 | 第69-70页 |
| 6.2.1 牛奶样本前处理方法 | 第69页 |
| 6.2.2 类ELISA流程 | 第69-70页 |
| 6.2.3 计算系统CCα和CCβ | 第70页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第70-71页 |
| 6.3.1 红霉素标准曲线 | 第70页 |
| 6.3.2 CCα和CCβ计算方法 | 第70-71页 |
| 6.3.3 不同添加浓度的回收率 | 第71页 |
| 6.4 小结 | 第71-73页 |
| 第七章 全文结论 | 第73-75页 |
| 7.1 本研究的主要结论 | 第73-74页 |
| 7.2 创新点 | 第74页 |
| 7.3 未来工作展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简介 | 第86页 |
