| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号和缩略语说明 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 灵芝概述 | 第13-14页 |
| 1.1 灵芝的基本特征 | 第13页 |
| 1.2 灵芝的药用研究 | 第13-14页 |
| 2 灵芝三萜的研究概况 | 第14-16页 |
| 2.1 灵芝三萜的化学结构 | 第14-15页 |
| 2.2 灵芝三萜的合成途径 | 第15页 |
| 2.3 灵芝三萜生物合成的影响因素 | 第15-16页 |
| 3 热胁迫对微生物的影响 | 第16-18页 |
| 3.1 热胁迫对微生物的形态特征影响 | 第16-17页 |
| 3.2 微生物响应热胁迫的生理变化 | 第17-18页 |
| 4 热胁迫响应的分子机制 | 第18-23页 |
| 4.1 热胁迫信号的感知 | 第18-20页 |
| 4.2 小分子信号物质 | 第20-22页 |
| 4.3 HSR的调节子-HSF | 第22-23页 |
| 4.4 热激蛋白 | 第23页 |
| 5 本论文的研究意义及主要内容 | 第23-25页 |
| 5.1 研究意义 | 第23-24页 |
| 5.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 热胁迫对灵芝的HSP表达、菌丝生长和次生代谢的影响 | 第25-37页 |
| 前言 | 第25页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.1 菌株及试剂 | 第25页 |
| 1.2 菌株培养 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-30页 |
| 2.1 热胁迫处理方法 | 第26页 |
| 2.2 菌丝分叉检测 | 第26页 |
| 2.3 三萜含量测定 | 第26-27页 |
| 2.4 灵芝总RNA的提取及cDNA制备 | 第27-29页 |
| 2.5 灵芝HSP基因的生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.6 实时荧光定量PCR (Real-time quantitative RT-PCR, Q-RT PCR) | 第29-30页 |
| 2.7 统计分析方法 | 第30页 |
| 3 结果分析 | 第30-35页 |
| 3.1 热胁迫抑制灵芝菌丝的生长 | 第30-31页 |
| 3.2 热胁迫减少灵芝菌丝分叉 | 第31-32页 |
| 3.3 热胁迫诱导灵芝HSP的大量积累 | 第32-34页 |
| 3.4 热胁迫诱导灵芝酸合成 | 第34-35页 |
| 4 本章讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 Ca~(2+)参与调控热胁迫处理菌株的HSP表达、菌丝生长和次生代谢 | 第37-57页 |
| 前言 | 第37页 |
| 1 实验材料 | 第37-38页 |
| 1.1 菌株及试剂 | 第37-38页 |
| 1.2 菌株培养 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-42页 |
| 2.1 热胁迫处理方法 | 第38页 |
| 2.2 碱裂解法提取沉默载体pRNAi质粒 | 第38-39页 |
| 2.3 灵芝cch基因沉默载体构建 | 第39-41页 |
| 2.4 灵芝电击转化及cchi沉默转化子的筛选 | 第41页 |
| 2.5 灵芝总RNA的提取及cDNA制备 | 第41页 |
| 2.6 实时荧光定量PCR | 第41-42页 |
| 2.7 菌丝分叉检测 | 第42页 |
| 2.8 三萜含量测定 | 第42页 |
| 2.9 胞内Ca~(2+)荧光检测 | 第42页 |
| 2.10 统计分析方法 | 第42页 |
| 3 结果分析 | 第42-55页 |
| 3.1 热胁迫提高胞内Ca~(2+)含量 | 第42-44页 |
| 3.2 Ca~(2+)螯合剂及钙通道抑制剂对热胁迫处理菌株胞内Ca~(2+)和菌丝分叉的影响 | 第44-46页 |
| 3.3 Ca~(2+)螯合剂及钙通道抑制剂对热胁迫处理菌株的HSP表达量的影响 | 第46-47页 |
| 3.4 Ca~(2+)螯合剂及钙通道抑制剂对热胁迫处理菌株的三萜含量的影响 | 第47-48页 |
| 3.5 胞内Ca~(2+)参与调控热胁迫处理菌株的菌丝分叉 | 第48-49页 |
| 3.6 胞内Ca~(2+)参与调控热胁迫处理菌株的HSP表达 | 第49-50页 |
| 3.7 胞内Ca~(2+)参与调控热胁迫处理菌株的三萜合成 | 第50-51页 |
| 3.8 Cch和plc参与调控热胁迫处理菌株的胞内Ca~(2+)及HSP表达 | 第51-55页 |
| 4 本章讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 ROS参与调控热胁迫处理菌株的HSP表达、菌丝生长和次生代谢 | 第57-81页 |
| 前言 | 第57-58页 |
| 第一节 热胁迫诱导胞内ROS积累调控灵芝的HSP表达、菌丝生长和次生代谢 | 第58-75页 |
| 1 实验材料 | 第58页 |
| 1.1 菌株及试剂 | 第58页 |
| 1.2 菌株培养 | 第58页 |
| 2 实验方法 | 第58-62页 |
| 2.1 热胁迫处理方法 | 第58-59页 |
| 2.2 菌丝分叉检测 | 第59页 |
| 2.3 三萜含量测定 | 第59页 |
| 2.4 灵芝总RNA的提取及cDNA制备 | 第59页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR | 第59页 |
| 2.6 胞内ROS检测 | 第59页 |
| 2.7 钼酸铵法测定胞内H_2O_2含量 | 第59-60页 |
| 2.8 过氧化氢酶(CAT)活性测定 | 第60-61页 |
| 2.9 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 | 第61页 |
| 2.10 抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性测定 | 第61-62页 |
| 2.11 统计分析方法 | 第62页 |
| 3 结果分析 | 第62-72页 |
| 3.1 热胁迫提高胞内ROS含量 | 第62-64页 |
| 3.2 ROS清除剂等对热胁迫处理菌株的ROS含量和菌丝分叉的影响 | 第64-67页 |
| 3.3 ROS清除剂等对热胁迫处理菌株的HSP表达量的影响 | 第67-68页 |
| 3.4 ROS清除剂等对热胁迫处理菌株的三萜含量的影响 | 第68-69页 |
| 3.5 Nox参与调控热胁迫处理菌株的ROS含量及菌丝分叉 | 第69-70页 |
| 3.6 Nox参与调控热胁迫处理菌株的HSP表达 | 第70-71页 |
| 3.7 Nox参与调控热胁迫处理菌株的灵芝三萜含量 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-75页 |
| 第二节 Ca~(2+)和和ROS参与调控热胁迫处理菌株的HSP表达、菌丝生长和次生代谢 | 第75-81页 |
| 1 实验材料 | 第75页 |
| 2 实验方法 | 第75-76页 |
| 2.1 热胁迫处理方法 | 第75页 |
| 2.2 三萜含量测定 | 第75页 |
| 2.3 灵芝总RNA的提取及cDNA制备 | 第75页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR | 第75-76页 |
| 3 结果分析 | 第76-79页 |
| 3.1 添加EGTA、LaCl_3的同时添加H_2O_2对热胁迫处理菌株的胞内Ca~(2+)及ROS含量的影响 | 第76-77页 |
| 3.2 添加EGTA、LaCl_3的同时添加H_2O_2对热胁迫处理菌株的HSP表达量的影响 | 第77-78页 |
| 3.3 添加EGTA、LaCl_3的同时添加H_2O_2对热胁迫处理菌株的三萜合成的影响 | 第78页 |
| 3.4 ROS清除剂及nox对热胁迫处理菌株的胞内Ca~(2+)含量的影响 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 全文总结 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 文章发表情况 | 第91-93页 |
| 附录Ⅰ | 第93-95页 |
| 附录Ⅱ | 第95-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
