| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 乳腺癌概述 | 第12页 |
| 1.2 生物素Avi-tag技术概述 | 第12-16页 |
| 1.2.1 Avi-tag简介 | 第12-14页 |
| 1.2.2 生物素与生物素连接酶BirA的简介 | 第14-15页 |
| 1.2.3 链霉亲和素简介 | 第15-16页 |
| 1.3 转录因子FOXA2概述 | 第16-19页 |
| 1.3.1 转录因子概述 | 第16页 |
| 1.3.2 FOX家族概述 | 第16页 |
| 1.3.3 转录因子FOXA2概述 | 第16-17页 |
| 1.3.4 转录因子FOXA2的结构与分子构象 | 第17页 |
| 1.3.5 转录因子FOXA2的生物学功能 | 第17-18页 |
| 1.3.6 转录因子FOXA2与肿瘤 | 第18-19页 |
| 1.4 转录因子FOXP2概述 | 第19-20页 |
| 1.4.1 转录因子FOXP2结构 | 第19页 |
| 1.4.2 转录因子FOXP2的生物学功能 | 第19-20页 |
| 1.5 FOXA2蛋白互作概述 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的、内容与意义 | 第21页 |
| 1.7 本论文的工作设想 | 第21-23页 |
| 第2章 生物素化FOXA2真核表达体系的构建 | 第23-33页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第23-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.3.1 生物素化FOXA2重组表达质粒的构建 | 第25-30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-31页 |
| 2.4.1 pcDNA3.1-Avi-FOXA2重组表达载体的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-33页 |
| 第3章 生物素浓度及细胞模型的选择 | 第33-42页 |
| 3.1 前言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第33-35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-40页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第35-36页 |
| 3.3.2 质粒共转染实验 | 第36-37页 |
| 3.3.3 培养基中添加不同浓度生物素 | 第37页 |
| 3.3.4 Western Blotting (WB) | 第37-40页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第40-41页 |
| 3.4.1 生物素浓度梯度 | 第40-41页 |
| 3.4.2 细胞模型的确定 | 第41页 |
| 3.5 讨论 | 第41-42页 |
| 第4章 Avi-FOXA2的生物素化检测、纯化及考马斯亮蓝染色 | 第42-48页 |
| 4.1 前言 | 第42页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第42-44页 |
| 4.3 FOXA2及生物素的表达检测 | 第44页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第44页 |
| 4.3.2 细胞传代 | 第44页 |
| 4.3.3 质粒共转染实验 | 第44页 |
| 4.4 蛋白纯化与电泳 | 第44页 |
| 4.4.1 蛋白的纯化 | 第44页 |
| 4.4.2 蛋白电泳 | 第44页 |
| 4.5 考马斯亮蓝染色 | 第44-45页 |
| 4.5.1 SDS-PAGE凝胶的配制 | 第44-45页 |
| 4.5.2 蛋白样的制备 | 第45页 |
| 4.5.3 电泳 | 第45页 |
| 4.5.4 考马斯亮蓝染色 | 第45页 |
| 4.6 结果与分析 | 第45-46页 |
| 4.7 本章小结 | 第46-48页 |
| 第5章 Avi-FOXA2质谱分析及结果生物信息学分析 | 第48-53页 |
| 5.1 前言 | 第48页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第48-49页 |
| 5.3 实验方法 | 第49-51页 |
| 5.3.1 质谱前样品处理,酶解 | 第49-50页 |
| 5.3.2 LTQ质谱分析 | 第50页 |
| 5.3.3 MS分析 | 第50-51页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第51-53页 |
| 5.4.1 质谱分析及生物信息学分析 | 第51-52页 |
| 5.4.2 讨论 | 第52-53页 |
| 第6章 分子生物学FOXA2蛋白互作的验证 | 第53-62页 |
| 6.1 前言 | 第53-54页 |
| 6.2 实验材料与仪器 | 第54-56页 |
| 6.3 实验方法 | 第56-59页 |
| 6.3.1 pcDNA3.1-his-FOXP2重组质粒的构建与鉴定 | 第56-58页 |
| 6.3.2 质粒共转染实验 | 第58页 |
| 6.3.3 蛋白免疫印迹法(WB) | 第58-59页 |
| 6.3.4 蛋白纯化 | 第59页 |
| 6.3.5 免疫共沉淀验证互作蛋白 | 第59页 |
| 6.4 结果与分析 | 第59-61页 |
| 6.4.1 pcDNA3.1-his-FOXP2重组表达载体的构建及鉴定 | 第59-60页 |
| 6.4.2 免疫共沉淀FOXA2互作蛋白的验证 | 第60-61页 |
| 6.5 讨论 | 第61-62页 |
| 第7章 临床样本中转录因子FOXP2与FOXA2表达量具有的相关性 | 第62-65页 |
| 7.1 前言 | 第62页 |
| 7.2 实验材料与仪器 | 第62-63页 |
| 7.3 实验方法 | 第63-64页 |
| 7.3.1 临床组织样本中蛋白的提取 | 第63页 |
| 7.3.2 Western Blotting (WB) | 第63页 |
| 7.3.3 统计分析 | 第63-64页 |
| 7.4 结果与讨论 | 第64-65页 |
| 7.4.1 乳腺癌临床样本中FOXA2与FOXP2蛋白的表达情况 | 第64页 |
| 7.4.2 讨论 | 第64-65页 |
| 总结与展望 | 第65-67页 |
| 1.结论 | 第65页 |
| 2展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录A 英文缩写 | 第73-74页 |
| 附录B 常用缓冲液和试剂配方 | 第74-75页 |
| 附录C 攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录D 英文缩写 | 第77-78页 |
| 附录E 常用缓冲液和试剂配方 | 第78-79页 |
