| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 文章综述 | 第10-19页 |
| 1.1 链霉菌介绍 | 第10-11页 |
| 1.1.1 链霉菌概述 | 第10页 |
| 1.1.2 链霉菌的次级代谢产物 | 第10-11页 |
| 1.2 TetR家族介绍 | 第11-14页 |
| 1.2.1 TetR家族的结构、分布 | 第11-12页 |
| 1.2.2 TetR家族蛋白与形态发生和抗生素产生 | 第12页 |
| 1.2.3 TetR家族蛋白与多药抗性 | 第12-13页 |
| 1.2.4 TetR家族功能 | 第13页 |
| 1.2.5 TetR家族研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 密旋链霉菌Act12 | 第14页 |
| 1.4 基因敲除技术 | 第14-16页 |
| 1.4.1 基因敲除技术的简介 | 第14-15页 |
| 1.4.2 基因阻断方法及原理 | 第15-16页 |
| 1.5 石林放线菌 | 第16-17页 |
| 1.5.1 石林放线菌简介 | 第16页 |
| 1.5.2 放线菌选择分离方法 | 第16-17页 |
| 1.6 研究的依据、目的及意义 | 第17-19页 |
| 第二章 spa7074基因敲除菌株的构建 | 第19-34页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 质粒 | 第19页 |
| 2.1.3 PCR引物 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.5 生化试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.6 试剂盒 | 第21页 |
| 2.1.7 抗生素 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 重组质粒pMD18T-kan-u的构建 | 第21-24页 |
| 2.2.2 重组质粒pMD18T-kan-u-d的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.3 spa7074基因敲除重组质粒pKT7074的构建 | 第25页 |
| 2.2.4 大肠杆菌与链霉菌属间接合转移 | 第25-26页 |
| 2.2.5 双交换突变株的筛选 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-33页 |
| 2.3.1 基因spa7074的功能分析 | 第27页 |
| 2.3.2 基因敲除重组质粒构建流程 | 第27-28页 |
| 2.3.3 重组质粒的筛选及验证 | 第28-31页 |
| 2.3.4 基因敲除突变株的筛选 | 第31-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 菌株发酵与代谢产物分析 | 第34-43页 |
| 3.1 材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 菌株 | 第34页 |
| 3.1.2 培养基 | 第34页 |
| 3.1.3 仪器和材料 | 第34-35页 |
| 3.2 方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 菌株的发酵和代谢产物检测 | 第35页 |
| 3.2.2 发酵产物抑菌活性的测定 | 第35页 |
| 3.2.3 化合物的分离纯化及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-41页 |
| 3.3.1 野生型菌株与突变型菌株在不同培养基下的表型观察 | 第36页 |
| 3.3.2 突变株 Δspa7074的代谢产物分析 | 第36-37页 |
| 3.3.3 发酵液抑菌活性的检测 | 第37页 |
| 3.3.4 化合物的分离纯化 | 第37-40页 |
| 3.3.5 寡霉素D抑菌活性的测定 | 第40页 |
| 3.3.6 寡霉素生物合成基因簇 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 石林放线菌的分离及活性菌株筛选 | 第43-52页 |
| 4.1 材料 | 第43页 |
| 4.1.1 材料来源 | 第43页 |
| 4.1.2 拮抗病原菌 | 第43页 |
| 4.1.3 培养基 | 第43页 |
| 4.1.4 仪器 | 第43页 |
| 4.2 方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 云南石林土壤样品的采集 | 第43-44页 |
| 4.2.2 云南石林土壤样品稀释液的制备 | 第44页 |
| 4.2.3 土壤放线菌的分离及纯化 | 第44页 |
| 4.2.4 具抑菌活性菌株的筛选 | 第44页 |
| 4.2.5 筛选到的有抑菌活性的石林土壤放线菌的鉴定 | 第44-46页 |
| 4.2.6 石林放线菌扫描电镜观察 | 第46页 |
| 4.2.7 对筛选出的抑菌活性强的石林放线菌进行代谢产物检测 | 第46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 4.3.1 石林放线菌的分离纯化 | 第46-47页 |
| 4.3.2 具有抑菌活性菌株的筛选 | 第47-48页 |
| 4.3.3 石林放线菌的 16S rDNA鉴定 | 第48-49页 |
| 4.3.4 石林放线菌的扫描电镜观察 | 第49-50页 |
| 4.3.5 具广谱抗菌性的石林放线菌的代谢产物检测 | 第50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 总结与展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
